[发明专利]一种鉴定鲢、鳙杂交和遗传渐渗个体的微卫星标记与特异性引物和应用

说明书

技术领域

本发明属于水产养殖中群体鉴定技术领域，具体的说是一种鉴定鲢与鳙的微卫星标记与特异性引物及其在鲢、鳙杂交和遗传渐渗个体鉴定中的应用。

背景技术

微卫星(microsatellites)或称简单序列重复(simple sequence repeats，SSR)是指由1～6个核苷酸组成的简单串联重复DNA序列。迄今研究过的所有生物种类中都发现了它的存在，并且分布密度很大。由于微卫星广泛分布于基因组中，具有密度大、多态性丰富、高度杂合且稳定性好、遵循孟德尔分离定律共显性遗传、易于PCR扩增等特点，已成为近年来最引人注目的新型DNA标记，并广泛应用于生物资源的家系谱系认证、基因连锁分析、遗传图谱构建、种质鉴定、种群遗传多样性等许多研究领域。

鲢、鳙在我国已有上千年的养殖历史，在我国水产养殖业中占有重要地位，由于这两种鱼类的养殖产量高、成本低、病害少、管理简单，它们已被引入多个国家和地区作为人类食物来源或调控水体水质。然而，由于国外环境与它们原产地的栖息环境有差异，鲢、鳙间杂交和遗传渐渗在很多国家和地区都有报道（Kolar CS et al.Asian Carps of the Genus Hypophthalmichthys(Pisces,Cyprinidae)–A Biological Synopsis and Environmental Risk Assessment.2005,Report to U.S.Fish and Wildlife Service per Interagency Agreement94400-3-0128；Tátrai I et al.Studies on the biological role and effects of Asian carps in Lake Balaton.A Balaton kutatásának,2006,évi eredményei Magyar Tudományos Akadémia Budapest ISSN1419-1075；Verigin BV et al.A case of natural hybridization between Hypophthalmichthys molitrix and Aristichthys nobilis(Pisces,Cyprinidae).Zoologicheskii Zhurnal,1979,58:190–196.）。此外，在我国也曾发现有鲢、鳙杂交个体，但仅限于人工繁殖场内（龚珞军等.汈汊湖养殖场出现鳙鲢杂交现象.湖北农业科学,1991,12:41.）。

鲢、鳙杂交个体生长速度均比鲢、鳙慢，其它方面也没有显示优势（龚珞军等.汈汊湖养殖场出现鳙鲢杂交现象.湖北农业科学,1991,12:41.）。因此，鲢、鳙之间的杂交和遗传渐渗势必会导致这两者经济性状的退化，这对我国“四大家鱼”的养殖业来说是一个巨大的潜在威胁。因此必须采取行之有效的方法来鉴定鲢、鳙杂交及遗传渐渗个体，并将这些个体清除，以保持我国鲢、鳙优良的基因库。然而，仅仅依靠形态学方法并不能准确判断鲢、鳙纯种个体及其杂交和遗传渐渗个体，因为很多鲢、鳙杂交和遗传渐渗个体并不表现出这二者的中间性状，而是表现出倾向于这二者之一的表型，多代遗传渐渗的个体有可能在形态特征上难以准确鉴定。因此，需要建立一种快速、准确的方法，对鲢、鳙杂交和遗传渐渗个体进行有效鉴定。Mia等曾采用3个鲢、鳙间无共有等位基因的微卫星标记来检测孟加拉国养殖场中的杂交个体(Mia MY,et al.Detection of hybridization between Chinese carp species(Hypophthalmichthys molitrix and Aristichthys nobilis)in hatchery broodstock in Bangladesh,using DNA microsatellite loci.Aquaculture,2005,247:267–273.）。然而，该方法存在不足之处，因为仅凭3个位点很难准确判断待测个体属于种间杂交还是遗传渐渗个体，甚至无法确定纯种鲢、鳙，需要多个标记位点组合加以分析，才能有效区别，标记位点检测得越多，识别就会越准确。因此本发明开发了18个鲢、鳙种间特异性微卫星标记，通过这些位点的综合分析，可以更加精确地鉴别鲢、鳙杂交和遗传渐渗个体。

发明内容