[发明专利]经典激活的巨噬细胞在治疗肝纤维化的应用

说明书

技术领域

本发明属于肝纤维化治疗领域，涉及巨噬细胞极化、细胞治疗领域。具体涉及一种经典激活的巨噬细胞在治疗肝纤维化的应用。

背景技术

肝纤维化由各种持续的慢性肝损伤导致，其渐进性发展最终可形成肝硬化，甚至诱发肝癌，严重威胁着人们的生命健康。针对晚期肝硬化的有效治疗手段十分有限，但有效的治疗可以逆转肝纤维化，甚至恢复肝脏正常的结构和功能。因此，探索有效的肝纤维化治疗方法具有重要的意义。针对肝纤维化的细胞治疗具有重要的临床应用前景。目前，国内外很多学者研究细胞移植对肝纤维化的治疗作用，所采用的细胞多为骨髓细胞、造血系统干细胞、间充质干细胞等。自体细胞移植具有无免疫排斥、获取方便和来源充足等优点，已成为最具前景的肝纤维化治疗方法之一。研究表明在肝损伤后骨髓来源的干细胞能募集到肝脏，分化成为肝细胞等，对肝纤维化-肝硬化有一定的治疗作用。采集患者外周血单个核细胞进行自体回输，能够有效缓解病人肝硬化症状，延长生存时间，具有较好的治疗效果。然而骨髓细胞是一群异质性细胞，其中的哪些细胞成分对肝纤维化起到治疗效果存在争议。James等利用单一细胞成分——巨噬细胞治疗肝纤维化，发现巨噬细胞治疗明显降低小鼠肝纤维化水平，改善小鼠的肝脏功能，为肝纤维化的治疗提供了新的思路。

巨噬细胞是机体重要的固有免疫细胞。在肝纤维化的发展过程中，巨噬细胞发挥着双刃剑的作用。一方面，活化的巨噬细胞分泌大量细胞因子，导致肝星形细胞激活并合成分泌大量胶原纤维；另一方面，巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶类(MMPs)，降解胶原纤维，诱发肝星形细胞凋亡，使肝纤维化消融缓解。提示纤维化过程中，巨噬细胞的功能复杂多样，具有一定的异质性。大量研究表明，活化的巨噬细胞可分为经典激活的M1型巨噬细胞和选择性激活的M2型巨噬细胞。二者对肝纤维化的作用不同，分别具有抗纤维化和促进纤维化的作用。

鉴于巨噬细胞的异质性和不同极化类型的巨噬细胞对肝纤维化的不同作用，体外极化诱导后的巨噬细胞有望成为对肝纤维化具有更好疗效的细胞类型。

发明内容

本发明的目的在于提供一种经典激活的巨噬细胞在治疗肝纤维化的应用，为临床治疗肝纤维化-肝硬化提供了新的有效方法。

 为实现上述本发明目的，本发明的技术方案是：经典激活的巨噬细胞在治疗肝纤维化的应用，其特征是：该经典激活的巨噬细胞在治疗和制备肝纤维化药物中的应用。

   所述的经典激活的巨噬细胞是由细胞因子LPS和 IFN-γ联合刺激诱导而成。

  所述的经典激活的巨噬细胞即：M1型巨噬细胞，是由100 ng/mL LPS和20 ng/mL IFN-γ诱导24小时得到。 

 本发明的有益效果是：M1型巨噬细胞本身高表达的基质金属蛋白酶（MMPs）分子，回输后募集自体巨噬细胞进入肝脏并分泌大量MMPs，二者协同作用，加速胶原纤维的降解，减轻肝纤维化。M1型巨噬细胞对肝纤维化有较好的治疗作用，为临床治疗肝纤维化-肝硬化提供了新的有效方法。

下面结合实施例及实施例附图对本发明作进一步详细说明，但不作为对本发明的限定。

附图说明

图1 A是光镜下分化成熟的巨噬细胞的形态观察（左10×，右20×）；

图1 B是 FACS检测培养第7天的细胞；

图2 是实时定量PCR检测巨噬细胞极化相关标志物的表达变化；

图3A(a)是天狼星红染色（10×），图3A(b)胶原沉积面积统计；

图3B是肝脏组织中Hyp含量的统计；

图3 C(a)是 α-SMA的免疫组化染色（40×），图3 C(b)是其统计结果；

图3 D是 回输4周后小鼠血清白蛋白（Alb）水平的统计结果；

图4 A 是不同极化类型巨噬细胞MMPs分子mRNA表达水平；其中，a为MMP-2，b为MMP-9，c为MMP-13；

图4 B 是不同极化类型巨噬细胞中趋化因子mRNA的表达水平；

图4 C是肝脏组织切片F4/80染色（40×）及细胞数目统计结果，其中，图4C(a) 是肝脏组织切片F4/80染色（40×），4C(b) 是细胞数目统计结果；

图4 D是回输1d后小鼠肝脏组织MMPs的表达；其中，a为MMP-2，b为MMP-9，c为MMP-13；

图4 E是回输后1周内尿液中Hyp含量统计结果。

具体实施方式

 1、小鼠骨髓来源巨噬细胞的培养及极化诱导