[发明专利]一种基于微小RNA let-7a诊断子宫内膜腺癌的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种基于微小RNA let-7a诊断子宫内膜腺癌的方法。 

背景技术

子宫内膜腺癌(endometrial carcinoma,EC)是常见的女性生殖道恶性肿瘤之一，约占女性癌瘤的7%，占女性生殖道恶性肿瘤的20-30%。近年来发病率呈逐年上升趋势，是威胁绝经后妇女健康的主要肿瘤之一。目前研究发现子宫内膜腺癌有两种类型，一种为雌激素依赖型（I型子宫内膜腺癌），一种为非雌激素依赖型（II型子宫内膜腺癌），两型的高危因素不同。前者的发生与雌激素长期刺激有关，多发生在内膜增生的基础上，病理类型以腺癌为主，分化好，肌层浸润浅，预后较好。后者与雌激素的刺激关系不大，多发生在萎缩内膜基础上，病理类型以浆液性乳头状腺癌多见，分化差，容易有深肌层浸润，预后不良。虽然I型子宫内膜腺癌常见且研究较多，但雌激素增高造成子宫内膜增生乃至癌变的具体机制仍然不明确。 

人类疾病往往是由于一些基因表达紊乱或失控所引起的。小RNA(microRNA,miRNA)是一类小分子非编码RNA，通过核酸序列互补性结合到特定的靶mRNA上来调节翻译或降解靶mRNA，是一种起负调控作用的分子。人类基因组中已确认的miRNA有几百个，可能参与30%人类基因组遗传信息的表达调控。miRNA作为新发现的参与高等生物基因表达调控的明星分子，在细胞增殖、分化、发育生物学和一些疾病如癌症、艾滋 病等方面都起到重要作用。Calin等人研究发现患有一种成年型B细胞慢性淋巴型白血病（CLL）常有miR-15a和miR-16-1基因簇的缺失或是表达下调。但目前少有关于miRNA与子宫内膜腺癌相关性的报道。研究miRNA基因的表达谱，寻找与子宫内膜腺癌相关的miRNA基因，并对其功能进行研究，有可能发现新的子宫内膜腺癌易感基因和新的药物靶点，有助于更好地理解子宫内膜腺癌的发病机制。 

let-7a是一类高度保守的miRNA分子，最初是在线虫的研究中被发现。鉴于miRNA在生命体中的广泛作用，我们认为一些参与子宫内膜腺癌重要生理或病理过程的关键基因会受到某些miRNA的调控。为了研究miRNA在子宫内膜腺癌中的作用，我们利用基因芯片(microarrays)法研究了子宫内膜腺癌病人组织中miRNA的表达谱变化。基因芯片法能够灵敏、快速对人类体内成熟的miRNA的表达进行大规模的检测和定量。与传统的Northern杂交，以及核糖核酸酶保护法(ribonuclease protection assays)相比，基因芯片法不需要接触放射性同位素，且所需要的样品量相对较少，检测范围广。我们应用这一分析手段研究了2个子宫内膜腺癌病人的肿瘤组织和周围正常组织中的miRNA的表达谱特征。研究结果显示，17个miRNAs在子宫内膜腺癌病人中的表达水平明显低于正常人，而另外15个miRNA表达显著上调。值得注意的是，let-7a在内膜腺癌肿瘤组织中的表达下调最为明显，约4～5倍。相关的研究表明，let-7a属于抑癌基因一族。在脑胶质瘤细胞株U87中过量表达let-7a，抑制细胞的体外增殖和转移，和降低裸鼠体内所成肿瘤的大小。另外，肝癌细胞的研究显示，let-7a参与促进肿瘤细胞的凋亡，因此可以增强药物sorafenib(诱导肿瘤细胞凋亡)的治疗效果。此外，人为 降低let-7a的表达显著增强非小细胞肺癌细胞的体内成瘤能力，重要的是以let-7a喂食荷瘤小鼠，显著抑制肿瘤的生长。结合其它研究报道，表明let-7a作为肿瘤抑制基因的功能和相关分子机制的研究已越来越受到关注，相关的研究结果也指出miRNA的替代疗法有望成为新的肿瘤治疗方法。尽管已取得的一些进展，但是let-7a如何影响子宫内膜腺癌的发生发展至今未见相关报道。