[发明专利]一种用于分离纯化GST标签融合蛋白的磁性亲和纳米材料及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种用于分离纯化GST标签融合蛋白的磁性亲和纳米材料，其特征在于，包括：四氧化三铁纳米颗粒和包裹于所述四氧化三铁纳米颗粒外部的聚多巴胺涂层，所述聚多巴胺涂层表面固定有还原型谷胱甘肽。

2.根据权利要求1所述的磁性亲和纳米材料，其特征在于，所述还原型谷胱甘肽通过所述聚多巴胺涂层表面富含的邻苯二酚基团固定。

3.一种根据权利要求1所述的磁性亲和纳米材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提供多巴胺溶液，向所述多巴胺溶液中加入四氧化三铁纳米颗粒，搅拌，磁性分离获得聚多巴胺修饰的四氧化三铁纳米颗粒；

2）提供还原型谷胱甘肽溶液，将步骤1）中制备的所述聚多巴胺修饰的四氧化三铁纳米颗粒分散到所述还原型谷胱甘肽溶液中，搅拌，磁性分离获得所述磁性亲和纳米材料。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中所述多巴胺溶液浓度为0.1-5mg/mL，加入的所述四氧化三铁纳米颗粒浓度为0.5-5mg/mL，搅拌时间为0.5-5h，步骤2）中所述还原型谷胱甘肽溶液浓度为1-10mg/mL，加入的所述聚多巴胺修饰的四氧化三铁纳米颗粒浓度为0.5-5mg/mL，搅拌时间为6-12h。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述还原型谷胱甘肽与所述聚多巴胺修饰的四氧化三铁纳米颗粒的比例为2︰1。

6.一种根据权利要求1所述的磁性亲和纳米材料在GST标签融合蛋白的分离纯化中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

1）提供根据权利要求1所述的磁性亲和纳米材料，加入细胞裂解液，振荡孵育，磁分离回收所述磁性亲和纳米材料；

2）提供洗涤缓冲液，向步骤1）中回收的所述磁性亲和纳米材料中加入所述洗涤缓冲液，通过磁分离反复清洗回收所述磁性亲和纳米材料；

3）提供洗脱缓冲液，向步骤2）中清洗后的所述磁性亲和纳米材料中加入所述洗脱缓冲液，振荡孵育，通过磁分离获得洗脱液，所述洗脱液中含有经过分离纯化的GST标签融合蛋白。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述细胞裂解液为重组大肠杆菌裂解液，表达GST标签融合的绿色荧光蛋白或GST标签融合的脂肪酶。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤1）中的所述细胞裂解液的总蛋白浓度为0.5-2mg/mL，加入的所述磁性亲和纳米材料浓度为1-10mg/mL，孵育的时间为0.5-1h。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，步骤2）中的所述洗涤缓冲液成分为50mM、pH7.4的Tris-HCl缓冲液、Triton X-100（0.5%w/v）、500mM NaCl，步骤3）中的所述洗脱缓冲液成分为50mM、pH8.0的Tris-HCl缓冲液、Triton X-100（0.5%w/v）、500mM NaCl、50mM还原型谷胱甘肽。