[发明专利]一种用于化疗方案选择的多重基因检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因检测试剂盒，尤其是一种同步检测多种抗肿瘤用药相关基因表达水平的试剂盒，属于医学分子生物学技术领域。

背景技术

众所周知，化疗是当今肿瘤治疗中最常用的选择方案，但是半数以上的患者经过化疗后常常疗效不大，同样的肿瘤药物对于不同病人的疗效往往会有很大的差异；同时化疗药物毒副作用较大，其在杀伤肿瘤细胞的同时，又杀伤正常组织的细胞，有时还可出现并发症，许多患者因为化疗的强烈毒副作用而倍受折磨，甚至死亡。大量临床研究证实，单凭经验治疗肿瘤，一般只有30%以下的疗效，且毒副作用明显。药物遗传学和药物基因组学的研究表明，不同病人基因表达水平的差异导致对各种抗肿瘤药物的疗效差异。

2012年Nature杂志已有文章指出，临床诊断已由传统地依赖于病理诊断方式转为更大程度上依据分子检测结果，分子检测已成为临床诊断的必要检测手段。高水平的分子检测手段及产品已为新时代的个体化治疗铺平道路。依赖于药物遗传学和药物基因组学在抗肿瘤药物作用机制等方面的最新研究成果，利用某些抗肿瘤药物的作用效果与相关基因表达的显著相关性机制，我们在进行化疗方案的选择前若能方便、快捷且准确地对病人的相关基因进行系统检测，可显著提高药物疗效并减轻毒副作用，并有效争取治疗时间，最终使病人在疗效和经济上获益。

目前与抗肿瘤用药最为密切相关的基因包括：PTEN（phosphatase and tensin homolog，同源性磷酸酶-张力蛋白）、EGFR（epidermal growth factor receptor，表皮生长因子受体)、DPYD（dihydropyrimide dehydrogenase，二氢嘧啶脱氢酶)、HER2（human epidermalgrowth factor receptor-2，人类表皮生长因子受体2）、RRM1（ribonucleotide reductase M1，核糖核苷酸还原酶M1）、ERCC1(excision repair cross complementation 1，切除修复交叉互补基因1)、TUBB3（tubulin-beta 3，beta-微管蛋白3）、TOP1（topoisomerase I，拓扑异构酶1）、TYMS（thymidylate synthetase，胸苷酸合成酶）、TOP2A（topoisomerase DNA II alpha，拓扑异构酶2）等，这些靶标基因mRNA水平的高低可指导诸如赫赛汀、吉非替尼、氟类、抗微管类等多种化疗药物的选择，以实施个体化治疗方案，提高疗效。

目前检测基因表达情况的常用方法有：FISH、免疫组化、荧光定量PCR（qPCR）、基因芯片等。其中，FISH是使用荧光标记的探针去检测组织切片上的RNA表达情况；免疫组化是使用抗体去检测组织切片上的蛋白表达情况。但是这两种方法的缺点都是无法定量，且实验结果必须要由有经验的检测员进行观察并主观判断。另外，基因芯片技术通常可以同时检测上千个甚至上万个基因的转录水平，但常应用于全基因表达谱的分析，用如此高通量的方法进行某些特定基因群的表达水平分析会导致成本太高，很难满足实际需求。而荧光定量PCR（qPCR）是检测RNA表达的常规技术，也是检测肿瘤组织基因表达情况的最常用的技术。但是如果需要检测多个基因的表达情况，则大多需要逐一对各个基因进行检测，且难以设置内参基因，通量低，成本高、便捷性差。

在一个反应体系中应用多对引物进行PCR扩增以期检测多个基因，即进行多重基因检测，需反复对扩增条件进行优化调整和验证，并需选择和验证合适的引物序列，若有成熟应用的检测产品将节省大量的人力和物力。

发明内容

本发明的目的是提供一种使用简便，准确性好，检测效率高的用于化疗方案选择的多重基因检测试剂盒，可一次性系统地检测多个与抗肿瘤用药密切相关基因的表达水平。

本发明为解决上述技术问题提出的一种技术方案是：一种用于化疗方案选择的多重基因检测试剂盒，包括RT引物的混合物和PCR扩增引物的混合物，所述RT引物的混合物中包括基于基因群、内参基因和反应内标的各RT引物，所述PCR扩增引物的混合物中包括基于相应基因群、内参基因和反应内标的各PCR扩增引物，还包括随机引物，所述基因群包括RRM1、TOP2A、ERCC1、TYMS、TUBB3、TOP1、PTEN、HER2、DPYD、EGFR ；所述内参基因包括ACTB、GAPDH和B2M；所述反应内标是KAN-r RNA。