[发明专利]一种免疫磁珠及其快速检测奥奈达希瓦氏菌的方法

权利要求书

1.一种免疫磁珠，其特征在于：其制备方法包括以下步骤：

1）制备奥奈达希瓦氏菌特异性抗体；

2）将羧基化聚苯乙烯磁性微球活化，洗涤干净，然后与步骤1）中制备的奥奈达希瓦氏菌特异性抗体进行振荡孵育，使抗体与磁珠充分结合；

3）将孵育的磁珠洗涤干净，然后封闭，清洗干净，4℃保存，即可获得免疫磁珠。

2.一种快速检测奥奈达希瓦氏菌的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）将权利要求1所述的免疫磁珠加入待测样品溶液中，在18～27℃下振荡反应，使免疫磁珠上的抗体与奥奈达希瓦氏菌体抗原充分结合；

2）步骤1）中结合反应完成后，用磁铁将免疫磁珠与样品基质分开，去样品基质，得到免疫磁珠-奥奈达希瓦氏菌免疫复合体； 

3）将2）中得到的免疫磁珠-奥奈达希瓦氏菌免疫复合体洗涤干净，加入显色液，发生显色反应，使蓝色产物生成完全； 

4）向蓝色产物中加入硫酸溶液终止显色反应，蓝色产物转化为黄色产物，检测其在450纳米处OD值，若OD值在0.029以上，说明此样品中含有奥奈达希瓦氏菌。

3.根据权利要求2所述的一种快速检测奥奈达希瓦氏菌的方法，其特征在于：步骤1）中免疫磁珠与样品溶液体积比为（1～5）：50。

4.根据权利要求2所述的一种快速检测奥奈达希瓦氏菌的方法，其特征在于：步骤1）中所述振荡反应的时间为10～70min。

5.根据权利要求2所述的一种快速检测奥奈达希瓦氏菌的方法，其特征在于：步骤3）中所述洗涤的具体过程为先用含4～6%（v/v）吐温20的PBS缓冲液洗涤3～4次，再用纯水洗涤干净。

6.根据权利要求2所述的一种快速检测奥奈达希瓦氏菌的方法，其特征在于：步骤3）中所述显色液的体积与样品溶液体积的比为（0.8～1.2）：5。

7.根据权利要求2所述的一种快速检测奥奈达希瓦氏菌的方法，其特征在于：步骤3）中所述显色液含有的0.1～5mM过氧化氢，90～110mM柠檬酸钠，190～210mM磷酸氢二钠，0.3～0.35mM四甲基联苯胺，pH值为 4～5。

8.根据权利要求3所述的一种快速检测奥奈达希瓦氏菌的方法，其特征在于：步骤3）中所述显色反应时间为5～60min。