[发明专利]一种玉米转基因组培苗的移栽方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种玉米转基因组培苗的移栽方法，属于玉米转基因组织培养技术领域。

背景技术

玉米是我国重要的粮食作物和经济作物，2012年我国玉米种植面积在5.24亿亩，平均亩产1400斤左右，2012年总产在4000亿斤左右。我国玉米在育种、栽培、植保、加工等领域的研究均处于国际领先水平。现代转基因技术的发展对提高玉米抗性、改良玉米品质等发挥重要的作用，玉米的转基因育种也逐渐在育种领域占有一席之地。由于玉米转基因育种所选择的自交系为易受侵染的自交系，抗逆性差，易感多种病虫害，且在恒温组培室里的遗传转化前期周期较长，导致玉米转基因组培苗适应性差，移栽成活率较低。通过转基因技术得到的具有优良性状的玉米再生苗，不能保证以高成活率移栽，限制了玉米组织培养和转基因技术的发展。因此，提高阳性苗的成活率至关重要。

现有玉米转基因组培苗的移栽方法包括炼苗、灭菌水洗净培养基、移栽至经过高压蒸汽灭菌的成品营养土中等步骤，此移栽方法有两个弊端：1、除短时间炼苗外没有提高组培苗抗逆性和适应性的措施，转基因玉米苗移栽成活率稍低，成活率约为60%-80%，平均每株结实20-30粒；2、对营养土的处理为高压蒸汽灭菌，不仅需要购买灭菌仪器，还需人工对营养土进行分装、灭菌、晾晒，增加经济和人工成本。

发明内容

本发明克服了上述现有技术的不足，提供了一种玉米转基因组培苗的移栽方法。采用该方法，玉米组培苗的移栽成活率提高到97%以上，移栽后玉米植株生产旺盛，能够正常的开花结实。

本发明的技术方案是：一种玉米转基因组培苗的移栽方法，其特征是，依次包括以下步骤：

（1）将生长在1/2MS生根培养基中的玉米转基因组培苗去掉培养瓶封口，在培养基上加2-3mm高度的无菌水，每天更换一次无菌水，培养室中炼苗1-2天；

（2）用镊子将组培苗从培养瓶中取出，灭菌水洗净培养基；然后将根及根茎连接处往上1-1.5cm的部位放入浸根液中浸50-80秒，吸水纸上晾干；所述浸根液具体为：每1kg水加入4.5-5.5g甲基硫菌灵（有效成分含量为70%）和4.5-5.5g硫酸铜钙（有效成分含量为77%）；

（3）将组培苗种植于营养土中（营养土需覆盖过根茎连接处1cm）；培养室内的湿度为65-75%，光照强度为4500-5500Lx，温度为27-29℃；

所述的营养土为：将腐殖质土、草木灰、蛭石按1:1:1的质量比混合均匀，按照每20升营养土（非压缩体积）添加甲基硫菌灵（有效成分含量为70%）和硫酸铜钙（有效成分含量为77%）各1克的比例添加并混合均匀，加水至手捏成团、松手即散，室温覆盖塑料薄膜静置，第2天加入20g生物有机肥（加水溶解），混合均匀，室温覆盖塑料薄膜静置2-3天后装入15cm×15cm-20cm×20cm带吸水孔的塑料营养钵中；所述生物有机肥的N+P₂O₅+K₂O≥5%，有机质≥45%，有益微生物≥10亿/克；

（4）移栽后的第5-7天和第10-12天，各喷雾1次0.03%的喹啉铜溶液，每次用量为100棵苗用8-12ml0.03%的喹啉酮溶液；

（5）移栽7天之内不浇水，防止污染及烂根，之后一周浇水一次；

（6）移栽三周之后，待转基因玉米苗芯叶长出、长势良好，即可移至大田或植物生长室，此后同普通玉米管理方法一致。

与现有技术相比，本发明具有如下优点和显著的进步：

1、利用本发明提供的玉米组培苗的移栽方法，玉米组培苗的移栽成活率提高到97%以上，移栽后玉米植株生产旺盛，能够正常的开花结实，平均每株结实25-40粒。

2.改进了营养土的配置和灭菌方法，节省经济及人工成本。

具体实施方式

实施例1玉米组培苗的移栽

（1）配制营养土

在玉米组培苗移栽前，将腐殖质土、草木灰、蛭石按1:1:1的质量比混合均匀，按照每20升土（非压缩体积）添加70%甲基硫菌灵可湿性粉剂和77%硫酸铜钙可湿性粉剂各1克的比例添加并混合均匀，加水至手捏成团、松手即散，室温覆盖塑料薄膜静置，第2天加入10g生物有机肥（N+P₂O₅+K₂O≥5%，有机质≥45%，有益微生物≥10亿/克，使用时加水溶解），混合均匀，室温覆盖塑料薄膜静置2-3天后装入15cm×15cm的带吸水孔的塑料营养钵中。

（2）炼苗