[发明专利]树突状细胞疫苗的制备方法

权利要求书

1.树突状细胞疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）从脐血中分离得到脐血单核细胞；

（2）用含1%FBS的RPMI-1640培养基贴壁培养脐血单核细胞，去除未贴壁细胞，向贴壁细胞中加入含有GM-CSF、IL-4、双抗和10%FBS的RPMI-1640培养基，继续培养；三天后补加半量的所述RPMI-1640培养基；

（3）第6天，将细胞混匀，换用含有1%FBS、GM-CSF、IL-4、IL-6、IL-1β和TNF-α（肿瘤坏死因子-α）的培养基，同时进行单表位多聚抗原肽（SEA-MVP）负载，并孵育过夜；

（4）第7天，进行常规检测后制备DC疫苗注射液。

2.如权利要求1所述的树突状细胞疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中，加入的GM-CSF浓度为500-1500UI/ml，IL-4浓度为200-1000UI/ml，IL-6浓度为500-1500UI/ml。

3.如权利要求1所述的树突状细胞疫苗的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中，培养基中GM-CSF浓度为20-100ng/mL，IL-3浓度为50-150ng/mL，双抗浓度为50-150U/mL，IL-1β浓度为1000-3000UI/ml、TNF-α浓度为500UI-1500UI/ml。

4.如权利要求1-3任一项所述的树突状细胞疫苗的制备方法，其特征在于，所述所述单表位多聚抗原肽的加入量为0.5-10mg/ml。

5.如权利要求1-3任一项所述的树突状细胞疫苗的制备方法，其特征在于，具体的，步骤（4）包括如下步骤：将促熟后的DC细胞进行离心清洗后吸去上清，用复方电解质注射液重悬细胞沉淀；将细胞沉淀离心后反复清洗3遍；将清洗后的DC细胞用10%的人血白蛋白的复方电解质注射液垂悬，混匀后进行装袋封口。