[发明专利]一种纳豆枯草芽孢杆菌以及由该菌株提纯维生素甲萘醌-7的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种纳豆枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis natto）ST188，CGMCC No.8400，以及由该菌株提纯维生素甲萘醌-7的方法。

背景技术

由于维生素K具有促进凝血的作用,又被称为凝血维生素。近半个世纪以来，人们对维生素K的认识仅限于其对凝血系统的影响，直到1960年Bouckaert发现维生素K可以促进兔子的骨折愈合。1975年，Pettifor等首次提出维生素K参与人体骨代谢的假说之后，人们对维生素K在骨骼新陈代谢的作用才有了深入的认识。

维生素K族包括数个脂溶性的2-甲基-1,4-萘醌衍生物。天然的维生素K包括维生素K1（即叶绿醌）和维生素K2（即甲萘醌类），其以在2-甲基-1,4-萘醌环状结构的3号位置上的亲脂性侧链为特征。叶绿醌的侧链是确定长度的不饱和烃链，甲萘醌的侧链则是不确定长度的不饱和烃链。（维生素K1即叶绿醌为一种化合物，维生素K2为一系列化合物）

维生素K2不单有促进凝血、改善动脉硬化的作用，国外也有作者在研究其对肝癌和白血病的作用。现在我国已进入老龄化社会，骨质疏松患者发病率较高。大量资料研究表明，维生素K2缺乏可导致老年人髋骨骨折和骨密度降低。维生素K2缺乏，血清未羧化骨钙蛋白水平降低，血清羧化骨钙蛋白水平也可能降低，从而可能导致老年人骨密度降低发生髋骨骨折危险。

维生素K2作为一种营养物质，并可以作为骨代谢调整物质，覆盖全身的作用；副作用较少，呈脂溶性，可以饭后服用，不论什么年龄都适宜使用。（邹志强，维生素K2的研究进展，中国骨质疏松杂志，2005，11（3）：389-392）

1995年日本开始将维生素K2制剂作为改善骨量减少、疼痛的骨质疏松症的药物销售。（王理明，维生素K2与骨质疏松，2007，26（4）：293-295）

维生素K2（2-甲基-3-全反式-聚戊烯-1,4-萘醌）或甲萘醌类是一族异戊烯基衍生物。由5个碳原子组成的异戊二烯残基的数量可用于区分甲萘醌系化合物。其命名规则是基于异戊二烯基的数量，例如“甲萘醌”或“MK”之后加上基团的数量。尽管甲萘醌侧链上已经被发现最多达到15个异戊二烯基，但在人类和动物组织中出现的只有含有2到13个异戊二烯基的甲萘醌。脱甲基化的甲萘醌，即在2号碳原子位点上未结合的甲萘醌也已经被发现。

维生素K2的一般性名称或常用名为甲萘醌，其基本成分为甲萘醌-4（MK-4）和甲萘醌-7（MK-7）。已知MK-7是活性最强的维生素K2中的一种。

叶绿醌及2种常见的甲萘醌结构图如下所示。

维生素K1

                                                  分子量：450

甲萘醌-4

   分子量：444

甲萘醌-7

                                                  分子量：649

然而目前，还没有一种能够简单、高效的提纯维生素K2的方法，尤其是提纯维生素K2的MK-7的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种纳豆枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis natto）ST188,CGMCC No.8400以及一种用该菌株提纯维生素甲萘醌-7（MK-7）的方法。该方法简单高效，并且能够获得维生素MK-7较高的纯度和收率。

本发明所提供的纳豆枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis natto）ST188，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2013年10月31日，保藏号为:CGMCC No.8400。

本发明提供的提纯维生素甲萘醌-7的方法包括以下步骤：

1）将纳豆菌发酵液喷雾干燥，用溶剂提取或浸溶纳豆菌发酵液喷干粉，获得浸溶液，所述纳豆菌为纳豆枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis natto）ST188，保藏号为:CGMCC No.8400；

2）将步骤1）获得的浸溶液浓缩得到浸膏；

3）将步骤2）获得的浸膏通过柱层析，并进行梯度或等度洗脱，将收集液浓缩，得到甲萘醌-7粗品；

4）将步骤3）得到的甲萘醌-7粗品结晶提纯，即得所述维生素甲萘醌-7纯品。