[发明专利]一种分泌抗CD10分子的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种可以识别人CD10蛋白质分子的单克隆分子及可分泌该抗体的杂交瘤细胞系。具体而言，本发明提供了一种抗肿瘤细胞表面抗原CD10分子的单克隆抗体，对该抗体重链和轻链可变区的氨基酸序列和编码可变区的DNA序列进行了确定，该抗体可以用于通过人工或自动化方式，以免疫组织化学染色（IHC）、酶联免疫吸附（ELISA）或免疫印迹（Western Blot）方式检测细胞中CD10的表达状态，从而用于对这些肿瘤进行诊断方法中，属于生物检测领域。

背景技术

CD10分子是存在于细胞表面的一种锌依赖性金属内肽酶（neutral metalloendopeptidase）, 受EDTA、磷酰胺(Phosphoramidon) 抑制, 又称为中性肽链内切酶( EC3. 4. 24. 11)或脑啡肽酶。该酶以锌离子作辅基, 能水解疏水性氮基酸的α-氨基所形成的肽键, 产生以苯丙氨酸、缬氨酸或酪氨酸为第一位残基的多肽，该酶的作用底物包括脑啡肽、缓激肽、血管紧张素Ⅰ/Ⅱ、神经降压肽、催产素、P物质以及趋化肽(甲硫氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸三肽，Fmlp)等。CD10分子是普通性和急性淋巴母细胞性白血病的抗原分子, 故可用作急性白血病和非霍奇金淋巴瘤分类常用的诊断指标。研究分析，CD10不仅表达于髓性细胞, 在非髓性细胞中也有表达，如乳腺肌上皮细胞（breast myoepithelial cell）、胆小管（bile canaliculi），成纤维细胞（fibroblasts）中，特别是在肾，胃上皮细胞的刷状缘高度表达。

除普通和急性白血病外，CD10近年来也被用于其他肿瘤的鉴别和确认，如子宫间质瘤（谷旸，王姝雯，刘文，备用目前已有将CD10抗体用于CD10 鉴别诊断子宫内膜间质肉瘤的系统评价，现代肿瘤医学，2011，19（11）：2301-2304），基底细胞癌（杨希川, 阎衡 , 叶庆佾, 钟白玉, 郝飞，CD10免疫组化染色在基底细胞癌和毛发上皮瘤鉴别诊断中的意义，重庆医学，2009，38（2）：142-143）、结直肠癌（黄文斌, 周晓军, 陈洁宇, 孟 奎, 石群立, 马恒辉, 陆珍凤，结直肠癌组织中CD10的表达及其临床意义，临床与实验病理学杂志，2005；20( 4)：446-448）、胃癌(黄文斌, 周晓军, 孟奎, 陈洁宇, 张丽华,胃癌组织中间质细胞CD10的表达及其临床意义,诊断病理学杂志,2005,12(6):447-449)，在原发性肺癌和甲状腺癌中的表达也有研究。最近发现，在软组织肉瘤中CD10的表达也有所上升（Kemal Deniz, Ganime Coban, Turhan Okten.Anti-CD10 (56C6) expression in soft tissue sarcomas. Pathology – Research and Practice. 2012, (208): 281– 285）。CD10分子为一分子量为100kDa左右的糖蛋白，选择不同的抗原进行免疫可能制备出不同结合特性的抗体，即便是同一种抗原获得的抗体也可以识别抗原的糖基化部分或蛋白质部分，该分子同时存在多种因可变剪切或单核苷酸多态性引起的变异体，最终导致不同抗体对表达抗原细胞的识别能力和模式不同。鉴于CD10分子在肿瘤病理研究中的重要性，已有不同的抗体制备用于在不同免疫学方法CD10分子。申请号为201180018729.6的发明专利“用于癌症诊断的方法和试剂盒”即描述了一种将CD13、CD59、CD10、CD26、CD142、CD143和MHC I中的一种或多种抗体单独或组合使用，以流式细胞术或ELISA方式进行前列腺肿瘤诊断的方法，其所使用的CD10单克隆抗体编号为MCA1556F，由新鲜制备的白细胞提纯膜抗原作为免疫原制备而来。公开号为CN103018463A的发明专利“检测急性B 淋巴细胞白血病相关免疫表型的试剂盒及其应用”也提供了以CD58、CD10、CD34、CD123、CD38、CD19 和CD45的抗体组合用于急性B淋巴细胞白血病的分型的方法，其所使用的CD10抗体编号为HI10a，尤其适合于流式细胞分析，目前在肿瘤诊断中使用最多的细胞株为CD10的56C6抗体。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种制备CD10重组蛋白的方法，该重组蛋白由信号肽、CD10分子的胞外区片段及用于纯化的组氨酸标签组成。

本发明的第二个目的是提供一种特异性好，亲和力高的CD10单克隆抗体的制备方法，该抗体能特异结合CD10重组抗原和天然抗原。

本发明的第三个目的是提供一种将本抗体用于肿瘤组织切片免疫组织化学检测的使用方法。