[发明专利]一种过敏原阳性血清的制备方法

权利要求书

1. 一种过敏原阳性血清的制备方法，其特征在于：包括依次进行的如下步骤：

步骤1、用自身免疫抗原对健康动物进行多次免疫，每次所述免疫之前，对所述健康动物进行取血测定OD值，当OD值稳定后，免疫结束，进行取血，获得抗血清；

步骤2、对步骤1所得的抗血清进行亲和纯化得到IgG抗体；

步骤3、将步骤2所得的IgG抗体和人IgE抗体按质量比为1:1~2偶联后，经分离纯化获得IgG-IgE连接物浓溶液，将所述的IgG-IgE连接物浓溶液稀释至浓度为0.5~1μg/ml，即得所述的阳性血清。

2. 根据权利要求1所述的过敏原阳性血清的制备方法，其特征在于：所述的健康动物为兔子。

3. 根据权利要求1所述的过敏原阳性血清的制备方法，其特征在于：步骤1中，每次免疫时所采用的所述的过敏原的质量为2~60mg。

4. 根据权利要求1所述的过敏原阳性血清的制备方法，其特征在于：步骤1中，先将所述的过敏原配置成浓度为4~8mg/ml的过敏原溶液，按所述的过敏原溶液与弗氏完全佐剂的体积比为1~1.5:1配置成乳液进行首次免疫；按所述的过敏原溶液与弗式不完全佐剂的体积比为1~1.5:1配置成乳液进行后续免疫。

5. 根据权利要求1或4所述的过敏原阳性血清的制备方法，其特征在于：所述的免疫次数为6~8次，每两次免疫的间隔时间为12~36天。

6. 根据权利要求1所述的过敏原阳性血清的制备方法，其特征在于：步骤1中，取血时采用耳缘静脉取血。

7. 根据权利要求1所述的过敏原阳性血清的制备方法，其特征在于：采用蛋白A sepharose CL-4B亲和柱进行所述的亲和纯化。

8. 根据权利要求1所述的过敏原阳性血清的制备方法，其特征在于：步骤3中，所述的IgG抗体和所述的人IgE抗体分别通过所述的2-亚胺四氢噻吩偶联剂和4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯偶联剂活化后，在2~8℃下进行偶联。

9. 根据权利要求1所述的过敏原阳性血清的制备方法，其特征在于：步骤3中，采用Supperdex200凝胶纯化柱进行所述的分离纯化。

10. 根据权利要求1所述的过敏原阳性血清的制备方法，其特征在于：步骤3中，采用含质量比为0.4~6%的牛血清白蛋白、pH7.5~8.5、0.09~0.11mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液将所述的IgG-IgE连接物浓溶液进行所述的稀释。