[发明专利]重组抗HGF/DLL4双特异性抗体、其制备方法和应用

说明书

本发明属于生物技术领域，更具体地，本发明公开了一种重组抗人HGF/DLL4双特异性抗体、其制备方法和应用。本发明的抗人HGF/DLL4双特异性抗体既能与HGF结合，还能与DLL4结合；进一步地，本发明公开的抗体具有SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列。本发明的重组抗人HGF/DLL4双特异性抗体具有良好的抗肿瘤效果。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，更具体地，本发明公开了一种重组双特异性抗体、其制备方法和其在抗实体瘤上的作用。

背景技术

恶性肿瘤是人类疾病致死的一大原因，近年来由于环境恶化，生活压力大等原因，恶性肿瘤在我国的发病率更是年年攀升。恶性肿瘤的治疗手段目前仍主要为放疗、化疗和手术治疗，治疗效果并不理想。随着单克隆抗体技术的兴起，利用抗体进行生物靶向治疗由于其毒副作用小，有望特异性完全清除癌细胞等其他技术无可比拟的优点，展示了很大的发展空间。但是由于肿瘤异质性大，尤其不同种类的肿瘤其肿瘤表面抗原也大不相同，开发广谱的抗肿瘤抗体极具挑战。

实体瘤的恶化与转移依赖于新生血管的形成。控制血管新生在阻断肿瘤细胞转移的同时切断对已发生癌组织的血液供给，从而剥夺肿瘤生长依赖的氧气和营养，进而杀灭肿瘤细胞。目前市场上通过这一机制作用的抗体阿瓦斯汀（Bevacizumab,Avastin）取得了巨大成功，已连续多年成为“超级重磅炸弹”药品，2012年位列全球药物销售第八名。阿瓦斯汀通过抑制血管内皮细胞生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）而阻止新生血管的形成。因此，开发针对新靶点的抗肿瘤血管新生的抗体药物将能产生巨大的社会效益和经济效益。

原癌基因受体酪氨酸激酶c-MET被发现在很多癌组织中过量表达，其与配体肝细胞生长因子（Hepatocyte Growth Factor,HGF）的结合可激活一系列的信号通路，从而促进肿瘤细胞的生长、增殖、入侵和凋亡抑制。研究表明，HGF-cMet信号通路通过诱导VEGF的上调并抑制血管生成抑制因子——凝血酶敏感蛋白1（thrombospondin1，TSP-1)的表达，极大地促进了肿瘤的血管新生[Zhang YW等，PNAS2003,100:12718-12723]。另外，HGF-cMet信号可上调Notch蛋白配体——Delta样配体4（Delta-like ligand4，DLL4）的表达，从而激活Notch-DLL4信号通路[Gao YF等，Chin Med J.2011,124:127-131]，而DLL4/Notch在脉管系统发育的不同阶段均有表达，其对血管的发生发展有重要的调控作用。研究表明，在血管生成过程中，VEGF可通过诱导DLL4的表达来抑制血管上皮细胞的过度增生，阻断Notch-DLL4信号通路，可促进内皮萌芽、增加血管密度、产生大量无功能血管。在MV-522异种肿瘤移植模型中，对VEGF和DLL4的同时阻断可大大抑制肿瘤生长[Ridgway J等，Nature.2006,444:1083-1087]。