[发明专利]活化部分凝血活酶时间测定法和活化部分凝血活酶时间测定用试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及活化部分凝血活酶时间（APTT）的测定方法、及APTT测定用试剂盒。 

背景技术

在临床检查的领域中，已知通过测定血液的凝固时间来研究血液凝固因子的异常等的检查。作为一般的血液凝固能力的临床检查之一，可举出APTT测定。APTT是指反映出血时血液通过与有阴性电荷的异物接触而开始的内因性凝固途径的功能的凝固时间。APTT的测定不仅是在内因性凝固因子的缺乏或异常的筛选检查中利用，还在肝素疗法的监测等中利用。 

APTT测定很早就确立为临床检查中利用的凝固时间测定法。此方法中使用有阴性电荷的活化剂，作为血小板第3因子的代替物的磷脂，和用于供给钙离子的钙盐。其测定原理如下。首先，向血浆加磷脂及活化剂，由活化剂活化血浆中的接触因子系统。向其中添加钙盐，则由于活化的接触因子系统及磷脂的作用而凝固反应被促进，最终纤维蛋白析出到血浆中。在APTT测定中，将纤维蛋白的析出看作凝固，将自钙盐的添加至纤维蛋白析出的时间测定为凝固时间。 

至今已开发了各种APTT测定用试剂，任何试剂均含磷脂主要的成分。在APTT测定用试剂中使用的磷脂有天然来源磷脂及合成磷脂的，出于临床灵敏度、疾病鉴别或品质升高的目的，近年，将多种合成磷脂混合使用（参照例如，US2011/159597）。另外，作为合成磷脂的种类，将磷脂酰乙醇胺（PE）、磷脂酰胆碱（PC）及磷脂酰丝氨酸（PS）的3种混合而含在试剂中成为主流。 

另一方面已知，在使用如上述一样的APTT测定用试剂的测定中， 在从受试者得到的血液样品中含作为抗磷脂抗体之一种的LA时，由于LA抑制对于血液凝固必要的磷脂，凝固时间延长。近年利用此凝固时间的延长，进行由含磷脂的APTT测定用试剂的LA的筛选检查。在此筛选检查中，通过使用磷脂浓度低的APTT测定用试剂，使由LA的向磷脂的抑制反应容易显现。另外，为了LA的检测，也存在将磷脂浓度不同的2种APTT试剂组合的试剂盒。 

发明概述 

本发明的范围仅由随附的权利要求定义，不受此发明概述的任何影响。 

在疑患血友病或凝固因子异常症等的与凝固因子的缺乏或异常关联的疾病的受试者的血液中存在LA时，通过由以往的APTT测定用试剂的测定无法判别凝固时间的延长起因于凝固因子的缺乏或异常，还是起因于LA。为了进行此判别，通常，有再进行由LA检测用试剂盒的检查，或者组合进行多种不同的检查的必要。因此，也存在由APTT测定进行与凝固因子的缺乏或异常关联的疾病的筛选检查的需求。 

为了降低LA对APTT测定用试剂的灵敏度，尝试了提高试剂中的磷脂含有量，或特别是提高六角形型磷脂酰乙醇胺（PE）或有阴性荷电的PS的浓度。但是，至今尚不知明确显示有效地降低对LA的灵敏度，或者不受LA的影响的试剂。 

鉴于上述情况，本发明旨在提供使降低样品中的LA的影响，并且正确地测定APTT成为可能的试剂盒及使用其的APTT测定方法。另外，本发明旨在提供非源于LA的血液凝固异常的判断方法。 

本发明提供活化部分凝血活酶时间测定方法。此方法包括：将被检血浆和含活化剂及25μg/mL以上的磷脂酰甘油的第1试剂混合的第1混合步骤、将第1混合步骤中得到的样品和含钙盐的第2试剂混合的第2混合步骤，和测定第2混合步骤中得到的样品的凝固时间的步骤。 

另外，本发明提供活化部分凝血活酶时间测定用试剂盒。此试剂盒含有：含磷脂酰甘油的第1试剂和含钙盐的第2试剂。第1试剂中的磷脂酰甘油的浓度是25μg/mL以上。 

使用本发明的试剂盒可使降低LA的影响地测定APTT成为可能，并且可抑制试剂的白色混浊或沉淀。另外，本发明提供使降低LA的影响地测定APTT成为可能的方法。再者，本发明提供判断非源于LA的血液凝固异常的有无的方法。 

发明详述 

以下说明本发明的优选的实施方式。 

本发明的方法中使用的APTT测定用试剂（以下，也简称为“试剂”）以25μg/mL以上的浓度含PG。PG只要是生物学或制剂学等的领域中一般使用的PG，就不特别限定。另外，PG可为合成磷脂，也可为从动物的大脑或植物的组织或微生物的菌体膜等得到的天然来源PG，但从试剂的品质的观点来看，使用合成的PG是优选的。再有，PG的脂肪酸侧链不特别限定，可举出例如棕榈酸、油酸、硬脂酸等。