[发明专利]从乳中提取蛋白质的方法

权利要求书

1.一种用于乳中所存在蛋白质的提取方法，该蛋白质在乳的正常pH值下具有至少一个疏水区以及负电荷，包括以下步骤：

a）撇取和脱脂该乳，

b）在允许所述蛋白质在层析载体上被捕获的pH值下，将包含所述蛋白质的脱脂和撇取后的馏分转移到层析载体上，在该层析载体上，嫁接有同时为疏水的和离子的配体，所述pH值高于4.6，

c）洗脱该蛋白质，

d）通过从所洗脱馏分中去除乳蛋白质来纯化该所洗脱馏分，以及

e）回收所述蛋白质。

2.根据权利要求1所述的方法，特征在于，在撇取和脱脂步骤（步骤a））之后，并且步骤b）之前，进行乳澄清步骤。

3.根据权利要求2所述的方法，特征在于，所述乳澄清步骤通过加入一定浓度的螯合剂进行，该螯合剂与所述乳混合之后，乳的胶束结构消失，获得澄清乳（酪蛋白溶液或抗乳血清）。

4.根据权利要求1或2所述的方法，特征在于，在撇取和脱脂步骤（步骤a））之后，并且在步骤b）之前，酪蛋白亚基簇被沉淀。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，特征在于，所述的同时为疏水的和离子的配体为4-巯基-乙基-吡啶。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，特征在于，包括洗脱所述蛋白质的步骤c）使用浓度在1.2到8M之间的尿素、和浓度在25mM和50mM之间的氨基乙酸,使用酸性pH值在4和6之间的水溶液的混合物，使用含水混合物包括从以下组中选择出的组分，优选地为两种或三种：磷酸钠和乙二醇，其中磷酸钠浓度在5mM和50mM之间，优选地为30mM；柠檬酸钠和乙二醇，其中柠檬酸钠的浓度在5mM和50mM之间，优选地为30mM；TRIS/NaCl及钙盐、和乙二醇，所述TRIS/NaCl及钙盐的浓度在1mM和10mM之间，优选地为5mM；辛酸钠和乙二醇，其中辛酸钠的浓度在10mM和100mM之间，优选地为30mM；使用一含水混合物，其与存在的混合物相关联的传导率低于3mS/cm，或者水，并且优选地为WFI（注射用再蒸馏水）。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述的方法，特征在于，步骤d）通过阴离子交换体层析进行。

8.根据权利要求7所述的方法，特征在于，在阴离子交换体层析步骤之后，蛋白质的洗脱使用1mM到50mM的钙离子溶液进行。

9.根据权利要求1-8中任意一项所述的方法，特征在于，所述蛋白质为重组蛋白质。

10.根据权利要求9所述的方法，特征在于，所述蛋白质为凝聚蛋白质。

11.根据权利要求10所述的方法，特征在于，所述蛋白质为因子VII和/或活化FVII（因子VIIa）。

12.具有正zeta电势的玻璃过滤器用于同时撇取和脱脂哺乳动物乳的用途。

13.连接有一同时具有疏水性的和离子的配体的载体的用途，用于提取存在于被撇取和脱脂过的乳中的蛋白质。