[发明专利]一种单链DNA核酸适配体修饰二氧化硅/四氧化三铁磁性微球的制备方法

权利要求书

1.一种单链DNA核酸适配体修饰二氧化硅/四氧化三铁磁性微球的制备方法，其特征在于，按以下步骤进行：

（1）采用化学共沉淀法合成Fe₃O₄纳米粒子，用油酸对其改性，得到粒径均一、分散性好并具有超顺磁性的Fe₃O₄磁性纳米粒子；

（2）采用溶胶凝胶法对步骤（1）制得的Fe₃O₄磁性纳米粒子进行SiO₂包覆，得到粒径均匀、分散性好并具有超顺磁性的SiO₂/Fe₃O₄磁性微球；

（3）将步骤（2）制得的SiO₂/Fe₃O₄磁性微球分散于无水乙醇中，加入APTES，对磁性微球表面进行氨基改性，得到-NH₂基修饰SiO₂/Fe₃O₄磁性微球；

（4）将步骤（3）制得的-NH₂基修饰SiO₂/Fe₃O₄磁性微球分散于水中，加入DTPA，在EDC和NHS作用下，通过酰胺反应得到-COOH基修饰SiO₂/Fe₃O₄磁性微球；

（5）将步骤（4）制得的-COOH基修饰SiO₂/Fe₃O₄磁性微球分散于Tris-HCl(20mmol/L tris,100mmol/LNaCl,5mmol/L MgCl₂)缓冲溶液中，加入EDC、NHS及核酸适配体溶液，室温下反应后，磁分离后用Tris-HCl溶剂多次清洗，磁分离，得到核酸适配体修饰SiO₂/Fe₃O₄磁性微球，分散于Tris-HCl溶剂中保存。

2.如权利要求1所述单链DNA核酸适配体修饰二氧化硅/四氧化三铁磁性微球的制备方法，其特征在于：以SiO₂/Fe₃O₄磁性微球为底材，表面通过化学键合修饰核酸适配体。

3.如权利要求1所述单链DNA核酸适配体修饰二氧化硅/四氧化三铁磁性微球的制备方法，其特征在于：所述步骤（5）中-COOH基修饰SiO₂/Fe₃O₄磁性微球键合适配体的条件为，-COOH基修饰SiO₂/Fe₃O₄磁性微球用量为50mg；键合溶剂为Tris-HCl缓冲溶液(20mmol/L tris,100mmol/L NaCl,5mmol/LMgCl₂,pH=5.5)，用量为0.75mL；EDC/NHS混合液用量为1.2mL，EDC浓度为6～10mmol/L，NHS浓度为1～4mmol/L；核酸适配体溶液浓度为66μg/mL，用量为50～200μL。