[发明专利]抗高危型人乳头瘤病毒蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及抗高危型人乳头瘤病毒HPV16型E6蛋白和HPV18型E7蛋白的单克隆抗体及其应用。

背景技术

HPV是一组无包膜、环状双链结构的DNA病毒，外形呈20多面体对称型。HPV属乳多空病毒科乳头瘤病毒属A亚群72个衣壳体，直径约45nm～55nm，分子量5×10⁶道尔顿。HPV基因组含7800～7900碱基对(bp)，包含4个部分：即早期转录区、晚期转录区、上游调控区和一个小的高度变异的位于E5和L2之间的非编码区，编码为9个开放读码框架。早期转录区又称为E区，由4500个碱基对组成，分别编码为E1、E2、E3、E4、E5、E6、E7、E8等8个早期蛋白（一些HPV不含E3，E8），具有参与病毒DNA的复制、转录、翻译调控和细胞转化等功能。E1与E2一起涉及病毒DNA复制与生活周期的完成，在病毒开始复制中起关键作用。E2全长蛋白可以作为转录激活因子，与上游调控区的DNA结合增加早期区的转录，E2小蛋白抑制早期区的转录。E3功能不清。E4与病毒复制突变有关，当病毒装配时表达在感染的晚期。E5与细胞表面受体比如EGF和PDGF相互作用，可能刺激感染细胞的增殖。E6与P53结合引起P53蛋白的降解，在病毒复制、宿主细胞不死性和转化中起重要作用。E7与宿主细胞中的Rb蛋白结合并导致刺激宿主细胞转录的E2F-Rb复合物的解离，在病毒复制、宿主细胞不死性和转录中起关键作用。晚期转录区又称为L区，由2500个碱基对组成，编码2个衣壳蛋白即主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2，组成病毒的衣壳，且与病毒的增殖有关。非转录区又称为上游调节区、非编码区或长调控区，由1000个碱基对组成，位于E8和L1之间。该区含有HPV基因组DNA的复制起点和HPV基因表达所必需的调控元件，以调控病毒的转录与复制。

为了不受宿主免疫系统的障碍完成生活周期，HPV用聪明的持久的策略来逃脱免疫监视。HPV必须通过破损的皮肤进入宿主，到达鳞状细胞的基层，鳞状细胞是HPV唯一进入宿主的细胞，一旦HPV病毒颗粒在鳞状上皮的基底层细胞感染，病毒DNA就会暴露和转运到宿主，病毒就建立了与宿主细胞严格捆绑在一起的基因表达模式，当感染还在基底层细胞时，就有了复制的元件但基底层细胞还没有分化，所以只有少部分基因表达，包括E5、E6、E7基因的表达相应的蛋白，这些蛋白会以加快的速度刺激宿主细胞的复制。

尽管HPV阻碍宿主的免疫反应，但大多数的生殖器HPV感染仍有成功的免疫反应。

HPV16感染的妇女血清抗体出现晚而且不是在所有HPV16感染的妇女中都能检测到抗体(针对L1)。Ho于2004年发现HPV16抗体IgG出现的平均时间在感染后8.3月。感染后12月以内，56.7%的HPV16感染妇女有抗体，16月以后67.1%的人出现，几年以后L1抗体消失。

2011年，KS Anderson研究发现在于HPV16型相关的头颈癌病人的血清中可以检测抗HPV16的E1、E2、E4、E6、E7和L1蛋白的抗体，但没有检测到E5和L2蛋白的抗体，其中E1、E7蛋白的抗体效价最高在1:1000以上，其他的在1：640。而且，L1抗体表示过去感染，HPV16的E6、E7抗体出现在侵蚀性癌症中，同时可以检测到HPV的DNA。

因为HPV很难在体外或动物模型中培养，因此缺乏很多关于药物治疗的信息，没有抗HPV病毒的药物，HPV损伤的治疗仍然主要依靠外科手术切除感染区的细胞，即使手术后仍然有可能向恶性方向发展，所以HPV感染的预防显得非常重要。

宫颈癌与高危型HPV感染关系密切，其自然病程有一个从宫颈上皮内瘤变（CIN）到原位癌再到浸润癌的一个连续发生、发展过程，大约8-10年。因宫颈癌有较长的癌前病变阶段，所以做好癌前筛查是防治宫颈癌的关键所在。HPV检测是筛查宫颈癌的有效辅助方法，所以大力开展HPV检测、尤其高危型HPV检测对宫颈癌的早期筛查、防治及在预测CIN的自然转归、治疗后的随诊上都有重要的作用。

研究表明，宫颈的高危型人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）持续感染是引起宫颈癌及癌前病变的直接病因。Mattheus等报道，在99.7％的浸润性宫颈癌中可以检测到13种高危型HPV，其中HPV16（50-60%）、HPV18（18%）等高危型的感染是引起宫颈癌变的首要因素。

高危型HPV16和HPV18型的基因整合到人的基因中，其中的E6和E7致癌基因可在宫颈癌组织中持续表达E6、E7蛋白，所以检查宫颈脱落细胞或宫颈癌组织中的E6、E7蛋白可作为筛查宫颈癌的一个辅助方法。