[发明专利]一种肺炎支原体培养鉴定试剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种肺炎支原体培养鉴定试剂及其制备方法，属于临床医学领域。

技术背景

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae Mp）是人类新近发现的一种病原微生物。它是一种由患者口鼻分泌物经空气飞沫传播，易引起散发性或区域性流行，其主要症状为呼吸道感染伴肺炎即肺炎支原体肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia MPP)的病原体，对人类有明显的致病性。Mp感染四季皆可发病，但秋冬季居多，婴幼儿和青少年为易感染人群，发病率为小儿肺炎类的20-30%，人口稠密及流行季节可达50%，流行周期为3-7年，近年来有流行周期缩短，发病率升高的趋势。Mp感染潜伏期长，病情发展缓慢，症状表现不明显，与常见细菌、病毒感染所致呼吸道症状相似，临床不易诊断或鉴别诊断而治疗药物又大不相同，临床治疗周期长，往往延误病情导致严重的并发症，故Mp感染的快速检测，准确诊断，及时诊治有着重要的临床意义。

目前用于Mp感染的实验室检测方法主要有两大类：一是血清Mp特异性抗体检测；二是Mp的培养、鉴定检测；其次有分子生物学检测，如PCR、基因探针等。分子生物学方法检测Mp，目前由于对扩增模板、方法等还无统一标准，临床只限于探索性研究，其单独用于疾病检测不多。血清特异性抗体检测有酶免法和凝集法，主要检测Mp-IgM或Mp-IgG；Mp-IgM产生快（7-10天），一个月后到达高峰，3-6月消退；Mp-IgG产生慢（3个月），维持时间长（1-3年）只适用于回顾性诊断。特异性抗体是Mp感染后机体通过其免疫系统进行免疫而产生的免疫应答物。因此患者的个体差异，样本是否采集于窗口期以及以往机体残留抗体对现时感染诊断的干扰等，都给临床感染患者的诊断及鉴别诊断带来困难，所以血清抗体检测强调必须双份血清，相邻抗体滴度相差4倍以上才有诊断价值。而培养鉴定法是根据Mp繁殖代谢的需求，科学合理调制培养基，根据Mp生物特性设计检测原理，根据指示剂颜色变化提示判定患者是否感染，方法准确、快速、灵敏。目前有关Mp检测试剂盒及药敏已有申报专利（申请号：10254575.5）但检测时间为24h，且未涉及基础原料提取。本发明Mp支原体快速培养鉴定试剂盒及制备方法检测时间为3h且包括基础原料提取，专利检索未见相关产品及专利文献。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肺炎支原体培养鉴定试剂及其制备方法，所述试剂能选择性培养肺炎支原体（Mp），抑制杂菌，利用指示剂颜色变化判定患者是否感染肺炎支原体。主要用于临床疑似Mp感染患者筛查及临床辅助诊断，为及时有效药物治疗提供参考。

为达到上述目的，本发明采取如下技术方案予以实现。

一种肺炎支原体培养鉴定试剂，所述试剂中各组分的质量百分比如下：

所述试剂中还包括青霉素10-50万单位/100ml。

所述试剂pH为7.0-8.0。

其中，所述基础培养液中各组分的质量百分比如下：

其中，母液为牛心浸液。

一种所述的肺炎支原体培养鉴定试剂的制备方法包括下述步骤：

(1)牛心浸液的提取：取刚屠宰（或新鲜冷冻）的健康黄牛牛心一个，去筋膜、油脂绞碎成糜状，按质量比为1:5-1:15的比例加入双蒸水混匀，低温连续搅拌12-20小时，煮沸，补齐水，保温10-15分钟，过滤，滤液调pH为7.0-8.0，再次煮至微沸，冷却、过滤、分装，121℃下15分钟高压蒸汽灭菌，冷至室温，冷藏备用，效期3个月。

(2酵母浸液提取：取新鲜高活性干酵母粉按质量比为1:10-1:20比例加入双蒸水溶解，煮沸，冷却至室温。低温连续搅拌12-20小时，4000-5000r/min，离心15-20分钟，取上清液调pH为7.0-8.0，煮至微沸，保温10-15分钟，冷却，再次离心15分钟，121℃下15分钟高压蒸汽灭菌，冷冻贮存备用，效期3个月。

(3)将(1)提取的新鲜牛心浸液与NaCl、胰蛋白胨、Na₂HPO₄溶解、混合；调pH为7.0-8.0，过滤，分装，灭菌冷却，得到基础培养液。

(4)将步骤（3）得到的基础培养液与标准小牛血清、酵母浸液、葡萄糖、Eagle培养液、酚红、亚甲蓝、青霉素、溶解混合。