[发明专利]一种新的食管癌标志基因的检测及应用

权利要求书

1.一种长链非编码RNA在制备用于食管癌辅助诊断或者疗效预测试剂中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述食管癌为食管鳞状细胞癌。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述长链非编码RNA序列如序列表中SEQ ID NO.1所示。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的用于食管癌辅助诊断或者疗效预测的试剂为实时定量PCR检测试剂。

5.一种用于食管癌辅助诊断或者疗效预测的实时定量PCR检测试剂盒，其特征在于，包括根据核苷酸序列为SEQ ID NO.1的长链非编码RNA设计并合成出特异性用于实时定量PCR的检测引物。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，用于长链非编码RNA实时定量PCR检测的特异性引物如序列表中SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示。

7.一种长链非编码RNA的检测方法，包括样品RNA的提取、样品cDNA的制备、lncRNA的扩增。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述的样品RNA的提取、样品cDNA的制备、lncRNA的扩增的具体步骤包括：

1)样品总RNA的提取：按照Life Technologies公司的试剂所需试剂及步骤提取食管鳞状细胞癌组织或肿瘤的Total RNA；再用NanoDrop ND-1000核酸定量仪定量(NanoDrop Technologies，Wilmington，Delaware)定量所提取的RNA的纯度和浓度，甲醛变性胶电泳质检确保提取的RNA的完整性。

2)样品cDNA的制备：采用TaKaRa试剂盒PrimeScript^TM RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)(货号RR047A)对提取的总RNA反转录合成cDNA；该试剂盒内含RNase-Free DNase，可有效去除混杂的基因组DNA。

3)lncRNA的扩增：采用TAKARA SYBR PremixEx Taq^TM II(TIi RNaseH Plus)荧光定量试剂盒，以反转录的cDNA为模板进行荧光定量PCR扩增。