[发明专利]基于原核密码子偏好性构建高表达IGF-1基因的工程菌在审
| 申请号： | 201410118148.5 | 申请日： | 2014-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN103911338A | 公开（公告）日： | 2014-07-09 |
| 发明（设计）人： | 刘文洪;叶志青;王炜钢;李俊峰;张贝贝;贾孟荻 | 申请（专利权）人： | 浙江中医药大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 王桂名 |
| 地址： | 310053 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 密码子 偏好 构建 表达 igf 基因 工程 | ||
1.一种基于原核密码子偏好性构建高表达IGF-1基因的工程菌，其特征在于：所述工程菌为能在胞内表达或分泌表达重组人胰岛素样生长因子融合蛋白的基因工程菌，所述工程菌为大肠杆菌工程菌，所述融合蛋白的氨基酸序列为Seq ID No：4所示。
2.根据权利要求1所述的基于原核密码子偏好性构建高表达IGF-1基因的工程菌，其特征在于：所述工程菌包括含有IGF-1基因的重组表达载体和表达菌株。
3.根据权利要求2所述的基于原核密码子偏好性构建高表达IGF-1基因的工程菌，其特征在于：所述重组表达载体的出发载体为未经优化的IGF-1人源原基因序列，其基因序列为Seq ID No：1所示。
4.根据权利要求1所述的基于原核密码子偏好性构建高表达IGF-1基因的工程菌，其特征在于：所述IGF-1基因包括全合成密码子优化后的IGF-1偏好序列①，其基因序列为Seq ID No：2所示。
5.根据权利要求1所述的基于原核密码子偏好性构建高表达IGF-1基因的工程菌，其特征在于：所述IGF-1基因包括全合成密码子优化后的IGF-1偏好序列②，其基因序列为Seq ID No：3所示。
6.根据权利要求2所述的基于原核密码子偏好性构建高表达IGF-1基因的工程菌，其特征在于：所述重组表达载体包括胞内表达载体和分泌表达载体。
7.根据权利要求6所述的基于原核密码子偏好性构建高表达IGF-1基因的工程菌，其特征在于：所述胞内表达载体为将IGF-1偏好序列①或IGF-1偏好序列②DNA分子插入到质粒PGEX4T-1和PET32a的多克隆位点处得到的重组质粒，所述胞内表达载体中启动所述DNA转录的启动子为T7启动子。
8.根据权利要求6所述的基于原核密码子偏好性构建高表达IGF-1基因的工程菌，其特征在于：所述分泌表达载体为将IGF-1偏好序列①或IGF-1偏好序列②DNA分子插入到质粒PET22b的多克隆位点处得到的重组质粒，所述分泌表达载体中启动所述DNA转录的启动子为T7启动子。
9.权利要求1所述的基于原核密码子偏好性构建高表达IGF-1基因的工程菌，其特征在于：所述大肠杆菌包括Escherichia coli BL21(DE3)、Rosetta(DE3)和Origami (DE3)。
10.权利要求2所述的基于原核密码子偏好性构建高表达IGF-1基因的工程菌，其特征在于：所述表达菌株包括一株经偏好性改造的工程菌株，该工程菌株命名为RPP②，RPP②目的蛋白的表达量是所构建的未经改造人源原基因工程菌最高表达量的2.4倍。
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