[发明专利]一种高效液相色谱法测定长春胺有关物质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用HPLC法测定长春胺有关物质的方法，尤其是合成长春胺过程的中间体的测定方法，属于药物分析领域。

背景技术

长春胺是由夹竹桃植物蔓长春花(Vinca major)、小蔓长春花(V.minor)、直立长春花(V.erecta)、异性蔓长春花(V.dilormis)分离的生物碱。长春胺为脑血管扩张药,能维持或恢复脑血管的生理扩张，增加缺血区的正常脑血流量，提高脑对血氧的利用率，改善缺氧脑组织代谢。

长春胺国际市场需求量很大，目前已可半合成，其合成路线有很多，关于其原料药及中间体有关物质控制的报道国内几乎没有，中国药典尚无与其相关的质量控制标准，建立一种高效，快速，准确，专属性强的高效液相色谱方法对其有关物质进行检测和控制具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于建立一种HPLC方法测定长春胺有关物质的方法。可用于长春胺原料药及长春胺在合成和储藏过程中可能产生的有关物质的检测和质量控制。

本发明提供了一种高效液相色谱法测定长春胺有关物质的方法，选用十八烷基键合硅胶色谱柱，流动相为乙腈-0.1M碳酸铵溶液（7:3）,检测器选用紫外检测器，检测波长为260nm。

本发明具体的实施方案中，所述流动相选自0.1M碳酸铵和0.2M乙酸铵溶液，优选0.1M碳酸铵溶液。

本发明具体的实施方案中，乙腈与0.1M碳酸铵溶液比例为80%~55%：20%~45%，优选乙腈比例为70%。

本发明具体的实施方案中，流动相流速根据色谱柱长短进行选择，可选用0.8 ml/min~1.5 ml/min。

本发明具体的实施方案中，检测波长优选260nm。

本发明提供的一种高效液相色谱法测定长春胺有关物质的方法，其具体的实施步骤包括：

取长春胺成品25mg，流动相超声溶解，配制成长春胺浓度为1mg/ml的供试品溶液。

取长春胺标准品25mg，流动相超声溶解，配制成长春胺浓度为1mg/ml的标准品溶液，取上述标准品溶液适量，流动相稀释500倍，配制成浓度为标准品溶液0.2%浓度的溶液，作为有关物质定量测定的对照品溶液。

取0.1ml合成长春胺的中间体Ⅰ的终反应液，流动相稀释至10ml，作为中间体对照溶液1。

取0.1ml合成长春胺的中间体Ⅱ的终反应液，流动相稀释至10ml,作为中间体对照溶液2。

分别准确吸取供试品溶液，对照品溶液，中间体对照溶液1和中间体对照溶液(2)5μl，注入液相色谱仪，长春胺主峰与相有关物质杂质峰之间的分离度应大于1.5，符合中国药典对分离度的要求，按主峰长春胺峰计算，理论塔板数为11549，大于5000，主峰与其他对照溶液峰的对称因子分别为0.98和0.96，均符合中国药典的标准。

本发明方法适用于长春胺测定的可以是长春胺纯品，粗品，原料药等以长春胺为主成分的产品。本发明的测定方法还适用于合成过程中的中间体Ⅰ、中间体Ⅱ及其他在合成过程中产生的未知中间产物的测定和质量控制。

附图说明

图1为长春胺供试品溶液色谱图。

图2为对照品溶液色谱图。

图3为长春胺合成过程中中间体Ⅰ和中间体Ⅱ的色谱图。

 

具体实施方式

实施例1

长春胺纯品，购自欧洲sigma公司，纯度为99.83%。高效液相色谱仪选用美国Agilent1260型号仪器，检测器为DAD检测器，色谱柱为thermo C18，4.6×250mm，5μm，检测波长260nm，进样量：5μl(G1315D自动进样器)，流速1ml/min,柱温：35℃，流动相：乙腈-0.1M碳酸铵溶液（7:3）等度洗脱。

实验步骤：

取长春胺纯品25mg，流动相超声溶解，配制成长春胺浓度为1mg/ml的供试品溶液。

取长春胺标准品25mg，流动相超声溶解，配制成长春胺浓度为1mg/ml的标准品溶液，取上述标准品溶液适量，流动相稀释500倍，配制成浓度为标准品溶液0.2%浓度的溶液，作为有关物质定量测定的对照品溶液。

分别取供试品溶液和对照品溶液，按照本发明色谱条件，分别注入液相色谱仪，按照本发明分析条件分析并记录色谱图。