[发明专利]一种海参肠道产碱性蛋白酶菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明属于功能微生物筛选技术领域，具体涉及一种海参肠道产碱性蛋白酶菌株及其应用。

背景技术

海参(Sea cucumber)富含大量生物活性成分，如黏多糖、皂苷、β-胡萝卜素、海胆紫酮、牛磺酸等，具有极高的营养和药用价值。国际市场上海参消费需求的不断增加引起海参价格一路攀升，大大刺激了海参捕捞业的发展。但海参的过度捕捞使许多商业品种资源遭到不同程度的破坏。而且在海参产品加工过程中，海参肠等下脚料直接作为废料扔掉，这样不仅污染环境，而且海参下脚料中的营养价值没有得到很好的开发。

海参蛋白质的营养价值以多肽含量为标准，而多肽活性是决定其保健功能的核心指标。海参多肽具有良好的溶解性和稳定性，易消化吸收，食用安全，具有降血压、预防心脑血管疾病、提高免疫力、抗肿瘤、抗疲劳和抗氧化等生物活性。因此，肽制品已成为海参深度开发的重要方向。研究发现海参中蛋白质含量占干重的55%，海参下脚料中的蛋白质含量也非常高。因此，采用高效的蛋白酶水解海参下脚料制备海参活性肽，可以实现“变废为宝”的目标。例如，用自溶法和商业用酶法酶解鲭鱼蛋白，得到了3种活性多肽，它们能抑制亚油酸的自动氧化，对DPPH也表现出很好的清除效果。

而在海参多肽制备过程中，获得高效的产酶菌种是制备蛋白酶的关键。因此，从海洋生物体内筛选具有特殊功能的微生物就成为酶解制备海参多肽的关键因素。

发明内容

本发明的目的是提供一种海参肠道产碱性蛋白酶菌株，及其在发酵海参下脚料制备海参多肽中的应用，从而弥补现有技术的不足。

本发明提供一种分离于海参肠道的产碱性蛋白酶菌株（Thalassobacillus sp.QDHF-1）,所述菌株为Thalassobacillus sp.于2013年10月18日保藏在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.8366。

本发明的菌株用于发酵生产海参多肽，一种工艺如下：将海参加工下脚料绞碎后按料水比1：5配制发酵培养基，121℃灭菌15分钟，按8%接种量接种菌株，在180r/min、30℃下发酵36小时，发酵液经离心过滤后，得上清液为海参多肽溶液。

为了提高发酵效率，在培养基中还加入硫酸铁，硫酸铁的质量浓度为0.01%；

本发明从海参肠道内筛选的产碱性蛋白酶菌株Thalassobacillus sp.QDHF，该菌种能够高效生产碱性蛋白酶，还可以有效地发酵海参加工下脚料制备海参多肽，实现了废物再利用的目的。

附图说明

图1：不同碳源对Thalassobacillus sp.QDHF菌株产蛋白酶的影响；

图2：不同氮源对Thalassobacillus sp.QDHF菌株产蛋白酶的影响；

图3：培养基初始pH值对Thalassobacillus sp.QDHF菌株产蛋白酶的影响；

图4：培养温度对Thalassobacillus sp.QDHF菌株产蛋白酶活力的影响；

图5：培养时间对Thalassobacillus sp.QDHF菌株产蛋白酶活力的影响。

图6：接种量对发酵海参下脚料制备多肽的影响；

图7：发酵时间对发酵海参下脚料制备多肽的影响

图8：料水比对发酵海参下脚料制备多肽的影响；

图9：不同浓度的海参肠发酵多肽清除·OH能力图；

图10：不同浓度的海参肠发酵多肽清除DPPH·能力图；

图11：不同浓度的海参肠发酵多肽清除O₂^-·能力图；具体实施方式

以下结合具体试验例对本发明作进一步的说明。

实施例1：Thalassobacillus sp.QDHF菌株的筛选：

一、材料与培养基：

1、材料海参

2、培养基