[发明专利]一株胶红酵母菌株ZZR-1#及该菌株生产角质酶的方法

权利要求书

1.一株胶红酵母菌ZZR-1#，其特征在于：分类命名为胶红酵母（Rhodotorula mucilaginosa），已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 8890。

2.利用权利要求1所述的胶红酵母菌ZZR-1#生产角质酶的方法，其特征在于：其具体制备步骤为：

步骤一、斜面培养：将储备于低温冰箱中的胶红酵母菌ZZR-1#菌种接种到斜面种子培养基上，在26-28℃下培养48h，得到斜面种子培养基培养的菌种，备用；

所述的斜面种子培养基为，每1000 ml培养基，加入马铃薯100克、胰蛋白胨 1.0-5.0g、乳糖1.0-5.0g和琼脂 17.0g，余量为水；

步骤二、摇瓶种子培养：取2-3接种环斜面种子培养基培养的菌种，接种于装有100mL摇瓶种子培养基的250mL锥形瓶中，并于27-29℃、160r/min摇床培养36h-48h，得到摇瓶种子培养菌种；

所述的摇瓶种子培养基配方为：每1000 ml培养基，加入乳糖1.5-15.0g、酵母粉0.5-5.0g、氯化钠 0.5-2.0g和硫酸镁 0.5-2.0g，余量为水，pH 6.3-6.8；

步骤三、扩大培养：将摇瓶种子培养菌种接种到装有200ml一级扩大培养基的500ml锥形瓶里，接种量为一级扩大培养基体积的3-5％；置于27-29℃恒温摇床中、160r/min环境下培养，摇床培养36h-48h，得到扩大培养菌种；

所述扩大培养基的配方为：每1000 ml培养基，加入豆饼粉0.5-5.0g、乳糖1.5-15.0g、酵母粉0.5-5.0g、氯化钠 0.5-2.0g和磷酸二氢钾0.075-0.100g、硫酸亚铁 0.01g，余量为水，pH 6.3-6.8；

步骤四、再次扩大培养：将扩大培养菌种接种到装有1.5L再次扩大培养基的5L锥形瓶里，接种量为再次扩大培养基体积的5-7％；然后置于27-29℃恒温摇床中、160r/min环境下培养48h-72h，得到再次扩大培养菌种；

所述的再次扩大培养基配方为：每1000 ml培养基，加入玉米淀粉0.5-5.0g、豆饼粉0.5-5.0g、乳糖1.5-15.0g、酵母粉3-8g、氯化钠 0.5-2.0g和硫酸镁 0.5-2.0g、磷酸二氢钾0.075-0.100g，硫酸亚铁 0.01-0.02g，余量为水，pH 6.3-6.8；

步骤五、发酵罐培养：将再次扩大培养菌种接种于发酵培养基中，接种量为发酵培养基体积的3-5%，培养温度27-29℃，搅拌速度150-165r/min，每分钟通入发酵液的空气体积与发酵液的体积比为1：5-1：9，pH值为6.5-6.6，发酵时间5-6 天；

所述的发酵罐培养配方为：每1000 ml培养基，加入玉米浆3.0-5.0g、豆饼粉0.5-5.0g、乳糖1.5-15.0g、酵母粉0.5-5.0g、氯化钠 0.5-2.0g和硫酸镁 0.5-2.0g、磷酸二氢钾0.075-0.100g，硫酸亚铁 0.01-0.02g，余量为水，pH 6.3-6.8；

步骤六、角质酶的分离：将发酵所得发酵液用12层纱布过滤，滤液于4℃下以5500rpm的转速离心30min，上清即为粗酶液；对所得粗酶液进行浓缩后，提纯，得到角质酶。