[发明专利]一种猪流行性腹泻病毒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物技术领域，特别是一种猪流行性腹泻病毒及其应用。

背景技术

猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea,PED）是由冠状病毒科猪流行性腹泻病毒引起的一种侵害猪肠道的急性传染病。主要引起哺乳仔猪的腹泻、呕吐、脱水，最终导致死亡，死亡率极高。本病在欧洲和亚洲传播非常广泛，每年都会给一些国家和地区造成严重的经济损失，给养猪业带来了巨大的危害。2013年4月以后猪流行性腹泻在美国爆发，迅速蔓延至美国20多个州，给美国养猪业造成了严重的打击。对于大多数的病毒性腹泻来说，防治措施一般选择疫苗免疫，虽然目前已有猪流行性腹泻的商业疫苗用于猪群，但该病毒还是出现在了免疫猪群中，给该病的预防带来了极大的困难，因此寻找一个新的具有较好免疫原性的毒株对于猪流行性腹泻的预防措施及诊断方法的研制有重大的意义。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种猪流行性腹泻病毒CHYJ130330及其应用。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种猪流行性腹泻病毒CHYJ130330，该病毒的分类命名为猪流行性腹泻病毒，拉丁文学名为porcine epidemic diarrhea virus（PEDV），该病毒已于2014年3月5日在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)(地址：武汉市武昌珞珈山)进行的保藏，保藏编号为CCTCC V201407。

进一步，所述病毒的全基因序列为SEQ ID No.1所示的序列。

一种猪流行性腹泻病毒作为疫苗的应用，所述病毒依次经过感染细胞、培养、收获病毒液、灭活和纯化得到疫苗原液后，加入佐剂即得病毒疫苗。

优选的，所述病毒感染的细胞为非洲绿猴肾细胞。

优选的，所述病毒感染细胞后，37℃，5%CO₂培养箱中培养，当细胞病变达80%以上时，收获病毒液。

优选的，所述灭活选用甲醛溶液。

优选的，所述疫苗原液中病毒浓度为10⁷TCID₅₀/mL。

优选的，所述佐剂为氢氧化铝。

一种以猪流行性腹泻病毒为免疫原制备抗血清的方法，所述病毒依次经过感染细胞、培养、收获病毒液、灭活和纯化得到疫苗原液后，用疫苗原液免疫动物，获得抗血清。

优选的，所述疫苗原液免疫动物时配合佐剂使用。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

1、本发明中的病毒CHYJ130330可在vero细胞中高效增殖，病毒浓度可达10⁷TCID₅₀/mL，无外源病毒污染；

2、本发明中的病毒CHYJ130330对仔猪具有较强的致病力，病毒滴度10TCID₅₀即能引起仔猪发病，有良好的免疫原性；

3、根据本发明中的病毒CHYJ130330制备的疫苗对猪的流行性腹泻具有较好的保护效果；

4、根据本发明中的病毒CHYJ130330制备的高滴度的血清抗体，具有较好的血清效价。

附图说明

图1为本发明中猪流行性腹泻病毒CHYJ130330在不同分比率下的电镜图片；

图2为本发明中猪流行性腹泻病毒CHYJ130330传代稳定性实验中不同代次RT-PCR检测结果。

图2中，1为F5，2为F20，3为F40，4为F50，5为F60，6为F80，7为F100，8.为F120，9为阴性对照，10为阳性对照，M为marker DL2000。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。

若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。

实施例1病毒的分离培养和鉴定

（一）病毒的分离、培养