[发明专利]一种应用DSE真菌进行蓝莓育苗及大面积栽培的方法

权利要求书

1.一种应用DSE真菌进行蓝莓育苗及大面积栽培的方法，其特征在于其包括如下步骤：

1）、DSE真菌的培养：

将DSE真菌自低温保藏的斜面试管菌种活化后，转接于PDA培养基的平皿中，于21-25℃恒温培养11-19天，分别在菌落边缘打孔成菌饼，并接入液体培养基进行培养或接入固体培养基进行培养；

所述的DSE真菌液体培养基的组成按重量百分计为：葡萄糖1.5-4.5%，麦芽浸膏1.5-4.5%，大豆蛋白胨0.3-0.7%，余量水，培养基pH值为50-6.0；震荡培养，培养容器装量10-40%；液体培养基高压灭菌后接入DSE真菌；种子菌种接种量为培养容器装量的10-20%；液体培养的培养条件为：摇床震荡转速为130-150r/min；21-25℃培养26-30天；培养结束后可直接使用或用匀浆机打碎菌体后备用；

所述的DSE真菌固体培养基由固体基本培养基与液体MEA组成，固体基本培养基的组成按重量计为：麦麸：麦壳：阔叶树锯末=1-2:1-3:1-3；液体MEA量为以上麦麸、麦壳、阔叶树锯末总重量的20-40%，培养基pH为5.0-6.0，静置培养，培养容器装量30-70%；固体培养基灭菌后接入DSE真菌，菌种接种量为培养容器装量的10-20%；固体培养的培养条件为：21-25℃培养26-30天；待菌丝长满整个培养基质时培养结束，可直接使用或用粉碎机粉碎后备用； 

2）、蓝莓苗的培养：

（1）蓝莓芽分化：按常规组培技术培养，所用的培养基是以WPM培养基为基本培养基，在每升WPM培养基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g、琼脂5-15g，添加的植物激素为玉米素1.0-3.0mg，培养基pH5.0-6.0；静置暗培养，培养容器装量10-30%，光照培养的条件为温度15-25℃，光照强度为1000-3000lx，光照时间8-16h/天，培养时间40-120天；

（2）蓝莓丛芽增殖：按常规组培技术培养，所用的培养基是以WPM培养基为基本培养基，在每升WPM培养基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g、琼脂5-15g，添加的植物激素为玉米素0.5-2.5mg，培养基pH5.0-6.0；静置暗培养，培养容器装量10-30%，光照培养的条件为温度15-25℃，光照强度为1000-3000lx，光照时间8-16h/天，培养时间40-120天；

（3））蓝莓苗继代培养：按常规组培技术培养，所用的培养基是以WPM培养基为基本培养基，在每升WPM培养基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g、琼脂5-15g，添加的植物激素为玉米素0.5-2.5mg，培养基pH5.0-6.0；静置暗培养，培养容器装量10-30%，光照培养的条件为温度15-25℃，光照强度为1000-3000lx，光照时间8-16h/天，培养时间40-120天；

（4）蓝莓壮苗生根：按常规组培技术培养，所用的培养基是以1/2WPM培养基为基本培养基，在每升1/2WPM培养基中均添加蔗糖或食用白砂糖20-40g，用滤纸球或小棉花团铺满所用的培养容器的底部，添加的植物激素为吲哚丁酸0.5-2.5mg，培养基pH5.0-6.0；静置暗培养，培养容器装量10-30%，光照培养的条件为温度15-25℃，光照强度为1000-3000lx，光照时间8-16h/天，培养时间40-120天；

（5）蓝莓扦插苗培养或蓝莓幼苗培养或一年生蓝莓苗培养：

所述的蓝莓扦插苗培养：经继代培养的蓝莓组培苗经低温驯化后，剪取生长健壮5-6cm的茎段以苔藓为栽培基质扦插到营养穴盘里，扦插后生长30-50天，然后剪取5-6cm的生长健壮、长势均一的营养穴盘蓝莓苗的无根茎段作为蓝莓扦插苗；

所述的蓝莓幼苗培养：壮苗生根培养后的蓝莓组培苗经低温驯化后移栽到以苔藓和草炭土为栽培基质的营养钵里，生长20-40天，即为蓝莓幼苗；

所述的一年生蓝莓苗培养：上述蓝莓幼苗继续生长11-13月，即为一年生蓝莓苗；

3）、DSE真菌与蓝莓的共生栽培：

蓝莓扦插苗或蓝莓幼苗或一年生蓝莓苗与DSE真菌按以下方法共生栽培：

（1）蓝莓扦插苗与DSE真菌的共生栽培：在具有遮阳网的露天大棚，或塑料薄膜温室，或玻璃温室中进行育苗载培，栽培蓝莓扦插苗的株距为3-10cm；培养条件为18-25℃光照培养，光照强度为2000lx，光照时间16h/天，环境湿度为60%-80%；在上述蓝莓扦插苗的基部放置3/5穴孔容积的栽培基质后，采用上述DSE真菌培养物与蓝莓扦插苗共生栽培，最后用栽培基质把扦插苗固定好，蓝莓扦插苗在14天左右开始生根，6个月后生长为根系发达的蓝莓幼苗；

（2）蓝莓幼苗与DSE真菌的共生栽培：在具有遮阳网的露天大棚，或塑料薄膜温室，或玻璃温室中进行育苗载培，栽培蓝莓幼苗的株距为10-30cm，培养条件为间歇光照培养，光照强度为1000-3000lx，光照时间8-16h，环境湿度为60-80%；放置栽培基质后，在上述蓝莓幼苗根部施加备好的DSE真菌液体或固体培养物，DSE真菌液体培养物的添加量为30-100mL，或 DSE真菌固体培养物的添加量为20-60g；蓝莓幼苗与DSE真菌共生60天后均形成菌根结构，继续生长2个月后可转移至大田进行大面积栽培；

（3）一年生蓝莓苗与DSE真菌蓝莓的大田栽培：先在大田中挖出定植穴，株距为20-60cm，再在定植穴内铺放栽培基质并施加的DSE真菌液体培养物30-100mL，或 DSE真菌固体培养物20-60g，最后把上述一年生蓝莓苗栽培于定植穴中；

在蓝莓生长过程中每年可以补施DSE真菌液体或固体培养物1-7次。