[发明专利]茄科枸杞属短柄枸杞组织培养及快速繁殖方法有效
申请号: | 201410110178.1 | 申请日: | 2014-03-24 |
公开(公告)号: | CN104094841A | 公开(公告)日: | 2014-10-15 |
发明(设计)人: | 李捷;冯丽丹;王有科;张宝琳;张广忠;蔡国军 | 申请(专利权)人: | 甘肃农业大学 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00 |
代理公司: | 甘肃省知识产权事务中心 62100 | 代理人: | 张克勤 |
地址: | 730070 *** | 国省代码: | 甘肃;62 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 枸杞 属短柄 组织培养 快速 繁殖 方法 | ||
技术领域
本发明属于植物组织培养领域,具体涉及茄科枸杞属短柄枸杞(Lycium brevipes)组织培养及快速繁殖方法。
背景技术
茄科枸杞属短柄枸杞(Lycium brevipes)是从美国引进的茄科枸杞属植物,主要分布在墨西哥西部和加利福利亚的索诺兰沙漠等地区,它主要产在沙漠和海岸地带,在美国西北部也用作绿化;其进化程度高于我国的枸杞,在生殖进化上,已经由雌雄同体和自交不亲和的二倍体进化到自交亲和的多倍体阶段,而我国仍处在自交不亲和的二倍体进化阶段。该种枸杞的引进对于我国枸杞的种质资源的改良有很大的意义。该种枸杞引进后面临的首要问题是进行扩大繁殖。
发明内容
本发明的目的是提供一种茄科枸杞属短柄枸杞组织培养及快速繁殖方法,以解决引进枸杞的繁殖问题。
本发明技术方案如下:本发明种子为茄科枸杞属短柄枸杞(Lycium brevipes)购于美国的S&S SEEDS,INC.联系方式为P.O. BOX 1275 CARPINTERIA AVE CARPINTERIA,CA 93013,USA。
一种茄科枸杞属短柄枸杞(Lycium brevipes)组织培养方法,具体步骤如下:
A、外殖体处理采用茄科枸杞属短柄枸杞(Lycium brevipes)幼嫩茎段作为外殖体,剪去叶片,留少量叶柄,每2-3个芽剪成一段,将茎段洗去污渍,后用水冲洗干净,冲洗时间为5-10min,然后将其放入超净工作台中,进行消毒,消毒后剪去茎段两端,放于培养皿中备用;
优选的,消毒的最佳方案如下:先用75%酒精振荡消毒5s,再用0.1 %升汞溶液消毒6分钟—6分10秒,最后用无菌水清洗3-4次;
B、初代培养
以MS培养基为基础培养基,添加不同类型的激素及数量进行初代培养。通过初代培养可以获得所繁育物种的无菌材料。这一阶段的培养效果依植物种类及培养基成分而异,可能形成一个芽或多个芽。
优选的,添加0.05mg/L的萘乙酸(NAA)、3%蔗糖和4g琼脂,使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8。培养条件为光强为3000lx全光照24h,温度为:22℃,湿度为70%RH。
C、继代培养
在初代培养的基础上获得的芽苗数量不多,还需进一步扩大繁殖,才能发挥组织培养快速繁殖的优势。
通过对L.brevipes的最佳培养基的筛选,培养材料为初代培养获得的单苗或丛芽,以MS为基本培养基,添加6-苄氨基腺嘌呤与吲哚-3-乙酸。
优选的,继代培养基主要成分以及培养条件如下:以MS培养基为基础培养基,添加0.05 mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.05 mg/L的吲哚-3-乙酸、1.5%蔗糖和4g琼脂,使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8。培养条件为光强为3000lx全光照24h,温度为22℃,湿度为70%RH。增殖系数最高,生长最旺盛。
D、生根培养
继代培养扩大繁殖后进行生根诱导获得完整再生的植株。
生根培养以1/2的MS为基本培养基,加入不同浓度的IAA。
优选的,生根培养基主要成分以及培养条件:以1/2的MS培养基为基础培养基,添加0.05 mg/L的IAA、1.5%蔗糖和4g琼脂,使用NaOH或HCl将培养基pH值调至5.8。培养条件为光强为3000lx下12h光暗交替,温度为22℃,湿度为70%RH。
E、炼苗以及移栽
炼苗:将生根的组培苗从培养室中取出,到与移栽条件相同的环境中闭瓶炼苗5-7天,
移栽:在移栽前对基质进行高温灭菌。移栽时将炼好苗的植株完整的取出,放入水中洗净根上的培养基,将苗子移栽到装有基质的花盆中,浇透水后,覆膜。
优选的,最适宜的炼苗移栽基质以1:1的泥炭与蛭石的混合物,移栽前对基质用0.1%多菌灵浇透,移栽时将炼好苗的植株的根部浸入0.1%多菌灵和0.1 g/LNAA的混合溶液中浸泡10min。
优选的,枸杞组培苗移栽初期,由于苗木幼嫩,必须设置遮阳网,光强度为全光照时的30%。前两日遮光密封保湿培养。第三日开始每日通风,通风时间逐日加长,同时逐渐增加光强,直到全天开放。适时浇水,隔日喷少量 0.1%多菌灵溶液,7天后喷1/4MS营养液。待幼苗成活后逐渐全光照。
发明的优点如下:
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