[发明专利]一种乳腺癌循环肿瘤细胞检测系统及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于乳腺癌循环肿瘤细胞检测领域，特别涉及一种乳腺癌循环肿瘤细胞检测系统及试剂盒。

背景技术

癌症是困扰人类生活的几大疾病之一，现在平均每年癌症发病率在22%左右；然而，目前的医疗设施所检测到的癌症大多都属于中晚期，发现的比较晚而此时的癌细胞已基本扩散，药物难以治疗。战胜癌症最重要的是早发现，早期癌症大都可以治愈。最初癌肿瘤细胞的无序生长使其失去了相互黏附的能力，松散的肿瘤细胞可以进入血管和淋巴管，进入血液循环或淋巴循环，通过血液循环实现转移的细胞称之为循环肿瘤细胞(circulating tumor cells；CTCs)。肿瘤发生转移的早期，循环肿瘤细胞(CTCs)可以沿循环系统种植于远处器官，逐渐形成转移灶。但是使用现有的、常规的、经验性的诊断手段却无法“看到”这样转移过程。因此，研究发展一种新的可以检测转移肿瘤细胞的方法是非常有必要的。乳腺癌细胞存在于人的乳腺中，相对于其它体内癌细胞更容易受到外在的机械作用力从而也更容易脱落形成循环肿瘤细胞；进而用特异性免疫磁性微球去捕获早期乳腺癌循环肿瘤细胞进行早期检测相对于其它癌症的早期检测更方便、准确。

通常检测血液中的CTCs的方法有两种，其中一种方法是采用磁性细胞分选技术，其原理是先将特异性抗体包被在有同源二抗的磁珠上制成免疫磁性微球，再与靶细胞上的抗原结合成“靶细胞-抗原抗体-磁球”复合物，该复合物具有磁响应性，在外加磁场的作用下向一定方向移动，靶细胞得到富集，采用阳性筛选和阴性筛选结合的方法分选出靶细胞。另一种方法是采用免疫细胞化学技术，其原理是利用抗原与抗体特异性结合的特点，使染色剂（荧光素、酶等）标记的抗体与特异性的肿瘤标志物（主要包括上皮细胞角蛋白CK、上皮细胞膜特异性抗原等）结合，通过酶和底物反应显色或其他显色方法来判断肿瘤细胞的存在，再由检测人员在显微镜下进行肿瘤细胞统计。

检测血液中的CTCs可分为以下两个步骤，（1）尽可能多的从患者的外周血中捕获CTCs；（2）尽可能的动用现有的临床检测方法对捕获的肿瘤细胞进行个体化分析。由于肿瘤细胞往往处于去分化状态，循环中的肿瘤细胞常也是高度异质性的，而一些变异的肿瘤细胞往往由于捕获系统的低特异性和低效性而逃脱掉捕，从而出现漏网现象，并得到假阴性结果，导致错误的诊断。因此，CTCs检测系统存在的主要问题为如何发展一种高效并具有高特异性的循环血肿瘤细胞捕获材料及检测系统。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种乳腺癌循环肿瘤细胞检测系统及试剂盒，本发明结合了磁性细胞分选技术和免疫细胞化学技术，更为准确的进行循环肿瘤细胞检测。

本发明的一种乳腺癌循环肿瘤细胞检测系统，包括：

乳腺癌循环肿瘤细胞捕获系统、磁分选装置和分析计数系统；

所述的乳腺癌循环肿瘤细胞捕获系统用于对样本血液进行免疫磁性细胞捕获、富集和对富集的靶细胞进行荧光染色；所述的乳腺癌循环肿瘤细胞捕获系统包括功能性富集盒、免疫磁性微球、细胞孵育装置和荧光染色剂；

所述的磁分选装置用于富集荧光染色后的靶细胞；

所述的分析计数系统包含荧光显微镜和高通量细胞影像分析仪，所述的高通量细胞影像分析仪通过连续扫描荧光显微镜下图像，自动分析产生数据。

所述的循环肿瘤细胞检测仪器还设置有计算机接口，通过计算机对分析计数系统进行控制。

所述的免疫磁性微球的粒径范围为0.1～10微米，免疫磁性微球表面活性物为单一抗-Epcam抗体、叶酸、抗-丙酮酸激酶抗体中的一种或两种。

所述的功能性富集盒为四方结构，其体积为0.1cm³～1.0m³，其中一面使用活性物修饰，所用活性物为抗-Epcam抗体、叶酸、抗-丙酮酸激酶抗体中的一种或两种，示意图见图2。

本发明的一种乳腺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒，包括：免疫磁性微球和荧光染色剂；所述的免疫磁性微球的表面活性物为单一抗-Epcam抗体、叶酸、抗-丙酮酸激酶抗体中的一种或两种。

所述的荧光染色剂为含有DAPI和FITC标记的CK蛋白染色剂。

所述的免疫磁性微球的粒径范围为0.1～10微米。

有益效果

（1）本发明结合磁性细胞分选技术和免疫细胞化学技术进行循环肿瘤细胞的富集和检测，通过分析计数系统对肿瘤细胞进行分析、计数，并实现对循环肿瘤细胞在分子及基因方面的分析，结果可靠性高；