[发明专利]利用章鱼加工废水提取多糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多糖的提取方法，特别是一种利用章鱼加工废水提取多糖的方法。

背景技术

章鱼作为重要的海洋经济类水产，因肉质肥厚，营养丰富、味道鲜美、口感独特，且具有较高的医用价值，作为高档水产品一直深受广大消费者青睐。其富含大量极有价值的天然生物活性物质：牛磺酸、章鱼肉碱、胶原蛋白、章鱼毒素等，在调节血压、治疗神经衰弱、抗菌消毒、促消化、增强记忆力、预防痴呆等方面发挥重要作用，可作为临床用药和附加值极高的保健食品添加剂。

以往研究认为，多糖类是海洋动物所含有的重要功效成分，具有抗肿瘤、增强免疫和抗衰老等活性。已有报道，章鱼多糖和糖蛋白能够促进小鼠脾细胞增殖，增强免疫抑制小鼠的非特异性免疫功能，具有免疫调节的作用。雷晓凌等研究发现，章鱼多糖对正常小鼠和免疫抑制小鼠脾细胞增殖均有促进作用，能提高免疫抑制小鼠脾细胞CD4/CD8比例，对培养的脾细胞中CD4+比例有较好的提高作用，跟对照组比增加了49.4％；对于脾细胞IL-2有较好的诱生作用，章鱼多糖是极具潜力的免疫调节功能成分。

章鱼多糖提取方法报道不多，主要包括冷水提取和酶解提取，一般采用柱层析技术进行纯化，该纯化方式较为繁琐。

我国章鱼加工行业产品多以出口为主，产品也以章鱼肉加工食品为主，而加工过程中产生大量废水，目前仍未得到有效利用。而以章鱼加工废水为原料，提取章鱼多糖则未见相关研究和报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种利用章鱼加工废水提取多糖的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种利用章鱼加工废水提取多糖的方法，包括如下步骤：

1）、将章鱼加工废水于55～65℃浓缩至原体积的1/18～1/22；

2）、在步骤1）所得的浓缩液中加入质量体积比为0.8-1.5%的木瓜蛋白酶或胰蛋白酶（即，8-15g蛋白酶/1000ml浓缩液），调pH至6.5-7.5，先于55～65℃水解5～7小时，然后升温至90℃保温10分钟，得水解产物；

备注说明：可采用0.1mol/L的稀盐酸或氢氧化钠溶液调pH；此调pH方式属于常规技术。

3）、在步骤2）所得的水解产物中加入体积倍数为3-4倍的95%（体积%）乙醇，搅拌，4℃放置12h（即4℃冰箱过夜）；4000-5000转/分钟离心10-15min，收集多糖沉淀；

4）、取步骤3）所得的多糖沉淀，加入8-10质量体积倍（1g/8～10ml）蒸馏水溶解；加入为蒸馏水4倍体积的Sevag试剂摇晃（剧摇）10-15min，4000-5000转/分钟离心10-15min，去下层蛋白及有机溶剂层；

所述Sevag试剂为氯仿：正丁醇=4:1的体积比混合而得；

备注说明：为了提高收率，上述步骤4）可重复2次；

5）、步骤4）所得溶液浓缩至原体积的1/5-1/10，并加入体积倍数为3-4倍的95%（体积%）的乙醇搅拌，4℃放置12h（即4℃冰箱过夜）；4000-5000转/分钟离心10-15min，收集多糖沉淀；依次用无水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿洗涤，真空冷冻干燥至水分含量≤5.0%，得章鱼粗多糖；

6）、称取5-6g章鱼粗多糖，加入1500-2000ml蒸馏水溶解，得粗糖液；

用截留量分子量为300K的超滤膜进行过滤，在过滤过程中待粗糖液剩余400-500ml时，添加蒸馏水至1500-2000ml，继续超滤，直至剩余400ml（即，直至稀释后的粗糖液剩余400ml，此部分含有300kD以上多糖，因此作废弃处理）；

7）、取步骤6）所得的滤出液，用截留分子量为100K的超滤膜进行过滤，直至剩余400ml-500为止，作为浓缩液；

取所述浓缩液浓缩至50ml，真空冷冻干燥至水分含量≤5.0%（质量%），即得分子量为300K-100K的章鱼多糖。

作为本发明的利用章鱼加工废水提取多糖的方法的改进：所述述步骤5）和步骤7）中的真空冷冻的工艺参数为：-20-30℃，真空度10～20Pa。

备注说明：本发明所述的章鱼加工废水是指煮章鱼的废水，即章鱼制品通过水煮实现熟化所产生的废水，其中含有多种水溶性章鱼活性成分。

本发明的利用章鱼加工废水提取多糖的方法，具有如下技术优势：

1、首次对章鱼废水中的多糖进行提取；具有变废为宝的技术优势。

2、首次采用超滤技术制备章鱼多糖；