[发明专利]一种羊棘球蚴亚单位疫苗及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体涉及一种羊棘球蚴亚单位疫苗，以及该疫苗的制备方法和应用。

背景技术

棘球蚴病(Echinococosis granulosis)又称包虫病(Hydatidosis)，是一种人兽共患的流行性寄生虫病，是广大牧区所面临的最严重的绦虫病之一，严重影响了畜牧业发展和人类健康。包虫病是由细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)的中期幼虫棘球蚴(Echinococcus)寄生在哺乳动物脏器所引发。而犬类是主要的终末宿主，在感染细粒棘球蚴后，幼虫在其小肠内发育成熟并产生虫卵。虫卵可随粪便排放及犬的活动污染自身皮毛、牧草、水源等区域。当人及其他哺乳动物接触到虫卵后，虫卵会在小肠内发育称棘球蚴，且该幼虫可进入血管随血液循环而进行转移，最终多寄生于肝、肺等脏器，并形成包囊并引发疾病。目前我国畜牧养殖产业中受到包虫病危害的家畜有11种之多，其主要危害表现为畜产品发育受阻、减产、及脏器废弃等，其中以绵阳及生猪感染情况尤为严重。在高发区，绵阳感染率高于60％，其中肺脏废弃率10－28％、肝脏废弃率8－25％、减产量平均2kg/只。以2009年报道计算，我国畜牧业年直接经济损失达10亿元，且呈现逐年递增状态。对家畜包虫病疫情的防控不彻底，不仅造成畜牧业的大量经济损失，同时也在危害着人类的健康。我国每年人感染包虫病的病例高于50万例，通过手术治疗的病例也超过3000例。以我国新疆地区为代表，人患包虫病的感染率高达31％，手术后复发率高达33％，更有患者为治疗包虫病反复手术而倾家荡产。在治愈的患者中，仍然有38％的治愈着无法恢复劳动能力。

疫苗是防控传染病最有效的手段，但至今仍没有一款用于预防棘球蚴病的产品。因此，急需一种用于预防棘球蚴病的疫苗。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种羊棘球蚴亚单位疫苗，本发明的目的之二在于提供羊棘球蚴亚单位疫苗的制备方法；本发明的目的之三在于提供羊棘球蚴亚单位疫苗的应用。

为实现上述发明目的，提供如下技术方案：

1、一种羊棘球蚴亚单位疫苗，所述疫苗的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

优选的，所述疫苗的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

更优选的，所述疫苗为无佐剂注射剂型疫苗或佐剂注射型疫苗。

最优选的，所述佐剂注射剂型疫苗含3mg/3mL的佐剂和含2500μg/3mL的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白，所述佐剂为氢氧化铝或磷酸铝。

所述无佐剂注射剂型疫苗含有浓度为2500μg/3mL氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的蛋白。

2、所述疫苗的制备方法，包括如下步骤：构建含SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的重组原核表达载体，然后将重组原核表达载体转化原核表达菌株，经发酵培养后纯化，得羊棘球蚴亚单位疫苗。

优选的，所述原核表达菌株为大肠杆菌BL 21菌株。

优选的，所述发酵培养为将原核表达菌株在37℃条件下震荡培养至对数期，然后将培养液全部接种于种子罐，再在37℃条件下培养至OD值为1.0-1.5时，将培养液接种于二级种子罐培养，最后转移至发酵罐中进行发酵，当菌体OD值达到40时，添加IPTG至终浓度为1mM诱导4-5小时。

优选的，所述纯化为将诱导后的培养液离心收集沉淀，经洗液I重悬后进行破碎，破碎后离心收集沉淀，再用洗液I重悬，并添加曲拉通至体积分数为1%，搅拌2-3h，然后用孔径为0.2μm的中空纤维柱超滤去除可溶性杂质，再进行浓缩，并加入与洗液I体积相等的洗液II，继续搅拌2-3h，继续用孔径为0.2μm中空纤维柱超滤，浓缩后收集沉淀，将沉淀用变性液溶解，37℃搅拌过夜，再用10kD截留分子量的中空纤维柱超滤，至悬液体积减少一半时，缓慢补加等体积的复性液，继续进行超滤浓缩，将浓缩液离心去除杂质，继续用0.45μm的中空纤维柱超滤，向滤出液中添加相当于滤出液2倍体积的变性液，然后超滤并收集滤出液，再用孔径为0.22μm的中空纤维柱超滤，收集滤出液，并向滤出液中添加相当于滤出液2倍体积的变性液后继续超滤收集滤出液，接着用10kD中空纤维柱超滤，超滤至蛋白含量大于30mg/mL。

3、所述疫苗在制备预防羊棘球蚴感染的疫苗中的应用。