[发明专利]槲皮苷在制备人γδT细胞增殖剂中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及槲皮苷在制备人γδT细胞增殖剂中的应用。

背景技术

近年来，肿瘤的生物治疗已经成为肿瘤治疗领域研究的热点。人γδT细胞主要分布于人黏膜和上皮组织内，具有较强的抗肿瘤作用，主要以主要组织相容性复合物（major histocompatibility complex，MHC）非限制性方式识别肿瘤，通过颗粒酶B（granzyme B）和穿孔素（perforin）等途径杀伤肿瘤细胞，并与其它固有免疫细胞和适应性免疫细胞相互作用，辅助发挥抗肿瘤作用。人γδT细胞已经成为肿瘤患者过继免疫治疗一个新的候选效应细胞。由此可见，有效扩增人外周血细胞，以满足γδT细胞生物学功能研究和临床过继免疫治疗的需要，提高γδT增殖率和功能是十分重要和必要的。

头花蓼（Polygonum capitatum Buch.-Ham.ex D.Don）为蓼科（Polygonaceae）蓼属（Polygonum）植物，多年生草本，为贵州特有的苗药，全草入药，具有清热利湿、解毒止痛、和血散瘀、利尿通淋的功效［中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志，第25卷第1分册.北京：科学出版社，1998：57-58.南京中医药大学，中药大辞典，第2版.上海：上海科学技术出版社，2006：850-850］。文献报道，头花蓼主要化学成分挥发油、脂溶性、木脂素类、酚酸类、黄酮类化合物等，其中，槲皮苷为其主要黄酮类化合物［赵新超，白虹，王元书，等.头花蓼总黄酮提取工艺研究.时珍国医国药，2009，20(11)：2815-2816］。

槲皮苷（quercitroside，quercitrin），即槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖（5,7,3′,4′-四羟基黄酮-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷）；分子式：C21H20O11；分子量：448.3769；化学结构式如下。

槲皮苷因其具有抗氧化、清除自由基、抗肿瘤、抗抑郁、抗病毒、保护肝脏、保护心血管等多种生物学活性，受到越来越多的关注［朱学鑫，蒋福升，丁志山.槲皮苷生物活性的研究进展.蛇志，2012，24(1)：47-49］。而槲皮苷对免疫细胞特别是对人γδT细胞的影响未见相关文献报道。

发明内容

本发明提供槲皮苷在制备人γδT细胞增殖剂中的应用。

本发明的技术方案是：由健康人外周血中分离单个核细胞，加入含有异戊烯焦磷酸和重组人白细胞介素-2的RPMI-1640完全培养基中诱导培养获得γδT细胞。使用不同浓度的槲皮苷作用γδT细胞48h后，用CCK-8法测定不同浓度槲皮苷组γδT细胞增殖能力；采用流式细胞术检测各组γδT细胞穿孔素和颗粒酶B的表达；用Western Blot法检测p-ERK、p-Akt和Bcl-2蛋白的表达。

研究表明，槲皮苷能够显著促进人γδT细胞的增殖，并能够促进其穿孔素和颗粒酶B的表达，具有一定的剂量依赖性；经槲皮苷处理后的γδT细胞，能够促进活性形式p-ERK1/2和p-Akt的表达，并可以促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，具有一定的剂量依赖性。

附图说明

图1培养前后γδT细胞比例（A：未培养；B：培养10天后）

图2不同浓度的槲皮苷对γδT细胞增殖的影响（*P<0.05,**P<0.01,compared with control group）

图3不同浓度的槲皮苷作用γδT细胞48h后，对穿孔素和颗粒酶B表达的影响

图4不同浓度的槲皮苷作用γδT细胞48h后，对p-ERK1/2、p-Akt和Bcl-2表达的影响

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：槲皮苷对γδT细胞增殖的影响实验

1材料与方法

1.1实验材料