[发明专利]甲肝病毒单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及病毒免疫学检测领域，具体地说，涉及甲肝病毒单克隆抗体及其应用。

背景技术

甲型病毒性肝炎简称甲型肝炎，是由甲型肝炎病毒（甲肝病毒，HAV）引起的一种急性传染病。甲型肝炎病毒属于微小核糖核酸病毒科，肝病毒属。病毒颗粒呈球形，直径约为27nm，无囊膜，衣壳由32个壳粒组成，呈20面体立体对称，每个壳粒具有四个多肽分别为病毒蛋白VP1、VP2、VP3和VP4，基因组为单股正链RNA，其长度相当于7500个核苷酸左右。在RNA的3′末端有多聚腺苷序列，在5′末端以共价形式与病毒基因组蛋白相连接。根据病毒核苷酸序列分析，可将人甲肝病毒分为四个基因型，但其抗原性相似，所以甲型肝炎病毒只有一个血清型。

甲型肝炎病毒主要通过粪-口途径传播，传染源多为病人。病毒潜伏期为15～45天，病毒常在患者转氨酸升高前的5～6天就存在于患者的血液和粪便中。发病2～3周后，随着血清中特异性抗体的产生，血液和粪便的传染性也逐渐消失。长期携带病毒者极罕见。HAV随患者粪便排出体外，通过污染水源、食物、海产品（如毛蚶等）、食具等的传播可造成散发性流行或大流行。也可通过输血或注射方式传播，但由于HAV在患者血液中持续时间远较乙型肝炎病毒短，故此种传播方式较为少见。

人类感染甲肝病毒后，首先在消化道中增殖，在短暂的病毒血症中，病毒又可继续在血液白细胞中增殖，然后进入肝脏，在肝细胞内复制繁殖。甲肝病毒仅有一个血清型和一个抗原抗体系统，因此其检测抗体可在世界各国使用。甲肝的发病机制不清楚，但是与肝脏免疫作用特别是细胞免疫作用相关。HAV可从肝细胞经胆汁进入肠道排出体外。因此，可从粪便中检出HAV颗粒加以确诊，在潜伏期或黄疸期的传染性最强。

临床表现：甲肝分为急性黄疸型，急性无黄疸型，亚临床型和急性淤胆型，其中急性淤胆型是急性黄疸型的特殊性，是由于肝细胞分泌胆汁功能受损。由于无论从临床表现还是从肝功能检查，都无法将急性甲型肝炎病毒感染与其他类型的肝炎病毒感染相区分，因此病原学检查对于诊断急性甲型肝炎病毒感染十分重要。

甲型肝炎的病原学检查包括：（1）抗HAV IgM:HAV感染后早期产生IgM型抗体，是新近感染的证据，也是早期诊断甲型肝炎最简便而可靠的血清学标志。在发病后数天即可阳性，一般持续8～12周，少数可延续6个月。临床上多采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测。（2）抗HAV IgG：出现稍晚，于2～3个月达到高峰，是过去感染的标志，可持续多年或终身。其他检测方法有：免疫电镜观察和鉴定HAV颗粒，体外细胞培养分离病毒，检测HAV RNA等，一般仅在实验研究中使用。

发明内容

本发明的目的是提供一种甲肝病毒单克隆抗体及其应用。

为了实现本发明目的，本发明利用甲肝病毒（TZ84株）全病毒颗粒作为抗原利用杂交瘤技术制备单克隆抗体，然后通过Southern Biotech单克隆抗体分型试剂盒对所获得的单抗进行亚型鉴定，通过免疫印迹法分析单抗特异性，采用间接ELISA法进行中和试验，获得了能够分泌中和甲肝病毒并能够特异性结合甲肝病毒的细胞系，及由该细胞系分泌产生的单克隆抗体。

在本发明的一方面，提供一种对甲肝病毒具有高中和效价的杂交瘤细胞株，即甲型肝炎病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株HAV mAb-6。该杂交瘤细胞株现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号CGMCC No.7859，保藏日期2013年7月10日。

在本发明的另一个方面，提供由上述杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体。

进一步地，本发明还提供根据所述单克隆抗体的抗原结合区域（例如重链和轻链可变区）发展出的各种衍生抗体，可以用于被动免疫治疗或者预防甲肝病毒感染，如人源化的抗体。

由于本发明的单克隆抗体对于甲肝病毒具有高水平的中和效果，因此本发明还提供所述单克隆抗体或其活性片段或保守性变异体，或其任意组合在制备用于检测甲肝病毒抗原的试剂、药剂或试剂盒中的应用。

本发明另一个方面提供用于检测甲肝病毒抗原，或抗甲肝病毒IgG或IgM的试剂盒、试剂、药剂，其包括本发明所述的单克隆抗体或其活性片段或保守性变异体，或其任意组合。所述试剂、药剂或试剂盒可用于检测甲肝病毒抗原。从而进一步用于诊断甲肝病毒感染。