[发明专利]一种快速测定灵芝产品中多糖肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药材分析领域，具体涉及采用HPLC-ELSD法快速测定灵芝产品中多糖肽的方法。

背景技术

灵芝是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌，为滋补强壮、扶正固本的珍品，已有悠久的药用历史。现代科学技术的应用使灵芝的研究更加深入，更进一步证明灵芝及其有效成分具有广泛的药理作用，可防治慢性支气管炎、神经衰弱、高血脂症、冠心病、肝炎、白细胞减少、肿瘤等疾病。灵芝多糖肽作为灵芝的有效成分之一，是从灵芝子实体中经水提取-柱层分离得到的多种糖肽，其中包含有GL-PPT2、GL-PPT3和GL-PPT4三种多糖肽。现代研究表明，灵芝多糖肽具有提高免疫力、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射、安神、降血糖、消除放化疗副反应、除胃热、保肝解毒等功效。目前对于多糖肽的检测仅有陈颖等人报道的FoLin-酚法（陈颖, 王赛贞, 林树钱. 用FoLin-酚法测定灵芝产品中多糖肽含量[J]. 海峡药学, 2007, 19(7): 37-39.），具体操作为在1mL样品中加入碱性铜试液1.0 mL，室温放置10min，加入4mL FoLin-酚试液，55℃水浴5min，冷却至室温，在750nm测定吸光值，但此法试剂配制繁琐，检测结果不够稳定。

蒸发光散射检测器的工作原理是恒定流速的高效液相洗脱液进入检测器后，先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室（漂移管），流动相及低沸点的组分被蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散色池，光束穿过散色池被散射，散射光被光电管接收形成电信号，电信号通过放大电路、模数转换电路、计算机成为色谱工作站的数字信号——色谱图，即获得待测组分的液相色谱。因此可以根据目标物的色谱保留时间、色谱峰面积与标准物质保留时间、色谱峰面积的比较，对化合物进行定性、定量测定。本发明采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器，对经过简单提取后的灵芝产品中多糖肽的含量进行检测，测定结果重现性好，稳定准确可靠。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高灵敏、简便快速测定灵芝产品中多糖肽的方法，是通过高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD)对样品进行定性、定量分析，本发明方法操作简单、重复性好，为灵芝产品中的品质评价及质量控制提供了一种有效、可靠的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种快速测定灵芝产品中多糖肽的方法，是采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器对灵芝产品中多糖肽的含量进行快速检测。

具体检测方法如下：

1）高效液相色谱条件

液相条件：色谱柱为TSK4000PW（7.8 mm×30 cm）；流动相为甲醇：水=20：80；流速为1 mL/min；柱温为35℃；进样量为10μL；

2）蒸发光散射检测器检测条件

漂移管温度为55 ℃；喷雾器为加热模式；气体压力为45 psi；

3）标准曲线绘制

精密称取干燥的多糖肽对照品0.0500 g于10 mL容量瓶中，用水溶解并定容，得浓度为5.00 mg/mL的多糖肽对照品储备液；临用前，分别取100 μL、200 μL、300 μL、400 μL、500 μL于5 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，得浓度分别为100.0、200.0、300.0、400.0、500.0 μg/mL标准工作液，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得到浓度-峰面积标准曲线；

4）样品处理

称取灵芝产品1-2 g，加水40 mL后于60 ℃水浴提取30 min，冷却，定容至50 mL；过滤，取滤液2 mL，加6 mL无水乙醇，混匀，于10000 rpm离心15 min，沉淀用流动相溶解，过0.22 μm有机滤膜后得样品溶液备用；

5）样品含量测定

吸取样品溶液进行测定后，根据浓度-峰面积标准曲线得出的线性方程，将多糖肽的峰面积换算为样品中多糖肽的浓度，从而计算出样品中的多糖肽含量。

所述灵芝产品包括灵芝原料药和灵芝保健品。

本发明的显著优点在于：本发明样品前处理的方法简单快捷、省时省力；采用蒸发光散射检测器进行检测，能有效排除杂质干扰，针对性强，有利于灵芝样品中多糖肽成分的准确定性与定量；本发明方法操作简便，重复性好，结果准确可靠，有利于灵芝样品中保健成分的鉴定分析。

附图说明

图1为灵芝多糖肽对照品色谱图。

图2为灵芝多糖肽对照品的标准曲线。

图3为灵芝多糖肽对照品的精密度试验重叠色谱图。

图4为灵芝样品重现性试验的重叠色谱图。