[发明专利]细胞侵袭趋化模型及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及细胞侵袭趋化领域，特别是一种涉及细胞侵袭趋化模型及其制备方法。

背景技术

目前为止做肿瘤细胞趋化实验、迁移实验、以及侵袭实验最常用的实验技术是Transwell，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，杯子底层是一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0um，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane），进行结果统计时将小室拿出后将细胞固定，染色，计数即可。

Transwell实验虽然能够证明细胞侵袭趋化迁移等现象，但是存在如下问题：（一）是通过间接观察细胞运动；（二）没有排除重力因素；（三）不能做相关蛋白表达的检测。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种在克服重力的基础上直观的证明细胞迁移及侵袭的过程以及细胞蛋白表达情况的细胞侵袭趋化模型及其制备方法。

解决上述技术问题的技术方案如下。

一种细胞侵袭趋化模型的制备方法，包括以下步骤：

（1）细胞培养：培养待研究的肿瘤细胞，吸取含有5x10⁵-1x10⁶个所述肿瘤细胞的细胞悬浮液备用；

（2）下层基质胶配置：

将基质胶与肿瘤细胞培养基以体积比3:2-1:1配置，混匀，加入胎牛血清，胎牛血清体积百分比浓度为8-12%，得基质胶A；

取60-80ul所述基质胶A加入PCR薄壁管中作为下层基质胶，进行培养；

（3）maker1配置：

取maker，灭菌后加到如（2）所述的基质胶A内，得基质胶B；

再吸取所述基质胶B均匀铺设一层在所述下层基质胶上，为maker1，进行培养；

（4）中间细胞层配置：

将步骤（1）中细胞悬浮液进行离心沉淀，弃掉上清液，将沉淀得到的肿瘤细胞加入50-70ul所述基质胶A内混匀，得中间细胞层；

将所述中间细胞层均匀铺设在所述maker1上，进行培养；

（5）maker2配置：

吸取步骤（3）中所述基质胶B，均匀铺设一层在所述中间细胞层上，为maker2，进行培养；

（6）上层基质胶配置：在50-70ul基质胶A中加入终浓度为3ng/8ul-1ng/ul待研究的趋化因子或细胞，混匀后得上层基质胶；

将所述上层基质胶均匀铺设在所述maker2上，置于培养箱中培养72小时至7天，即可。

在其中一些实施例中，所述肿瘤细胞为大肠癌细胞sw480。

在其中一些实施例中，所述与所述肿瘤细胞对应的趋化因子或细胞为humanTGF-Beta1-Mammalian。

在其中一些实施例中，所述步骤（2）～（5）中的培养为将所述PCR薄壁管置于37℃的5%CO₂培养箱中30min。

本发明还提供一种根据上述制备方法制备所得的细胞侵袭趋化模型。

本发明相对于现有技术的优点及有益效果为：

本发明制备的胞侵袭趋化模型能够在克服重力的基础上直观得出细胞趋化和迁移的有力证据而且可以进行HE染色，做免疫组化以及免疫荧光，从而可以观察细胞相关蛋白表达情况。

附图说明

图1为本发明细胞侵袭趋化模型的结构示意图，其中10为PCR薄壁管；20为上层基质胶；30为maker2；40为中间细胞层；50为maker1；60为下层基质胶；

图2为Bradley Products.Inc黑色或者绿色的Dabidson Marking（纹身粉）对sw480细胞体外生长曲线的影响示意图；

图3为模型切片HE染色结果示意图；

图4为模型切片IF染色结果示意图；

图5为模型切片IHC染色结果示意图。

具体实施方式

以下通过实施例进一步说明本发明，但下列实施例并不作为对本发明保护范围的限制。

实施例1

一：模型制作（具体模型见图1）