[发明专利]一种食用油中苯并(a)芘的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及苯并(a)芘的前处理技术，尤其涉及一种食用油中苯并(a)芘的提取方法，属于食品分析领域。

背景技术

苯并(a)芘是由5个苯环构成的多环芳烃（PAHs）化合物，是一种强致癌物质，在生产植物油的过程中可能因环境污染或原材料带人或加工时温度过高而产生。

目前，我国检测植物油中苯并(a)芘的最新国标测定方法(GB/T22509-2008)中采用氧化铝装柱，固相层析法进行前处理，存在着操作时间长、试剂消耗大、回收率不稳定、对试剂和人员要求较高等问题，以致不能很好地用此法对植物油中苯并(a)芘残留进行快速有效检测。欧盟208／2005号文件规定食用油中BaP的最大限量2μg/kg,国际食品法典委员会(CAC)规定食用油脂中BaP的最大限量5μg/kg，GB2716-2005食用植物油卫生标准规定我国最大限量为10μg/kg，与国际限量有较大差异。2010年3月，我国湖南金浩茶油股份有限公司（下简称金浩公司）等即被查出致癌物“苯并芘”严重超标，我国逐渐加强对苯并芘检测的重视，随着人们食品安全的关注日益加强，对相关的检测有了更加严格的要求。而植物油中苯并(a)芘的测定则是食品检验机构最常见的检测项目之一，因此建立一种快速准确和科学可靠的植物油中苯并(a)芘含量的检测方法具有积极意义。

影响油脂中苯并(a)芘测定的主要因素是油脂中大量的甘油三酯和脂肪伴随物，且食用油中苯并(a)芘以痕量级存在，在萃取和纯化过程中易进一步损失，影响检测结果准确度。许多有机化合物会和苯并(a)芘一起被萃取出来，干扰进一步的分离和定量检测。很多PAHs的结构相似，使得苯并(a)芘的分离检测困难。目前，我国检测食用油中苯并(a)芘的国标测定方法GB/T5009.27-2003食品中苯并(a)芘测定和GB/T22509-2008动植物油脂苯并(a)芘的测定反相高效液相色谱法两种方法。国标测定方法GB/T5009.27-2003采用荧光分光光度法和目测比色法，受环境因素影响较大，易受到外界干扰产生误差；国标测定方法GB/T22509-2008中高效液相-荧光检测器法简单快速，但方法中对净化用的中性氧化铝要求高，处理复杂，实际操作中的重现性和操作性不强，操作复杂。

近几年，也不断涌现出了其他几种检测食用油脂中苯并(a)芘的前处理方法，下面列举几个比较典型的方法:方法一水解皂化，皂化可以有效地去除油脂，用KOH或NaOH的甲醇或乙醇溶液与一定量食用油一起进行回流皂化，皂化4h后，未皂化物再用环己烷等进行液一液萃取，萃取物经浓缩后检测；方法二凝胶渗透色谱分离。该方法基于尺寸排阻的分离原理，利用样品中各组分分子大小不同，从而在凝胶中滞留时间不同而达到分离目的。凝胶渗透色谱对样品进行净化分离时大分子首先流出，需配合同位素稀释法采用气质检测；方法三固相萃取，是一种基于液-固分离萃取的试样预处理技术，用固相萃取富集净化。将油样溶解进行提取，加入到活化后的固相萃取柱中，富集后进行梯度洗脱，洗脱液经过浓缩后检测。方法四液-液萃取，通过调节不同试剂的配比，改变苯并(a)芘在油脂与试剂的溶解分配比，从而将其分离，浓缩后进行检测。

对于食用油中苯并(a)芘的分析测定来说，前处理技术十分关键。GB/T5009.27-2003食品中苯并(a)芘测定标准中采用的荧光分光光度法检出限不定，当试样量不足或点样量不足时就无法达到1ng/g的检出限；目测比色法，只能进行概略定量，且这两种方法易受到外界干扰。GB/T22509-2008动植物油脂苯并(a)芘的测定反相高效液相色谱法标准中采用单纯的氧化铝净化柱净化基质，当油脂的取样量增大时会随着洗脱液流出，影响测定。

而对于新兴的几种检测方法，其中水解皂化法，耗时长，皂化不完全对结果影响较大，造成灵敏度和准确度下降；凝胶渗透色谱法中，苯并(a)芘具有良好的亲脂性，在洗脱过程中竞争结合导致滞留时间不明确，尺寸排阻分离效果不好，处理后残油量多，影响检测；固相萃取法对柱子的填料要求严格，对于食用油成分复杂，填料的成分不易选择。同时通过大量的实验表明，在用固相萃取过程中会消耗大量的有机试剂，产生大量的废液，不易于推广应用，且用不同的固相萃取柱洗脱后均有残油，对苯并(a)芘检测准确性有影响；简单的液-液萃取容易造成油脂残留、回收不充分等问题。现有的文献中提到的采用乙腈饱和的正己烷进行溶解，然后采用正己烷饱和的乙腈萃取的苯并(a)芘提取方法中，首先采用乙腈饱和的正己烷溶解食用油，该步骤除脂效果一般，而且两相经一定比例混合分离后，溶有油脂的正己烷层处于上层，不利于吸取分离，从而影响后续的液相检测，对仪器产生污染，导致检测灵敏度低，仪器使用寿命短。