[发明专利]鉴别检测狗源性成分的PCR检测引物试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物生物技术领域，具体涉及到狗源性PCR检测试剂盒及其检测方法。

背景技术

畜禽肉食品的动物源性成分的鉴别检测已涉及到肉食品的工业、进出口贸易、市场及餐饮业等领域。目前国内外利用分子标记技术对畜禽源性成分鉴别方法做出了一定的研究工作。美国、意大利对牛源性成分的检测进行了研究，日本对牛、绵羊、猪、鸡的动物源性成分进行了研究。国内对畜禽源性成分鉴别检测中的研究报道大多是对牛、羊、猪、鸡、马、驴、鹿等源性成分的检测研究，但对狗源性成分鉴别检测的研究报道几乎没有。随着我国畜牧业的发展以及人们生活水平的提高，肉狗养殖和整体开发作为一个全新产业应运而生，掀起了肉狗养殖热，取得了可观的经济效益。然而，由于多年来对肉狗饲养的研究工作滞后，未能形成肉狗的规模化饲养，一些不法商贩为获取暴利，一些行为严重地损害了消费者利益。另外，由于狗的屠宰比较分散，狗肉来源不明，动物检疫员上市场补检，无法实施宰前、宰后检疫程序，检疫质量得不到根本保证，从而存在极大的食品安全隐患。因此，研究出一种准确、快速、可靠的鉴别检测食品、非食用性动物产品、饲料及饲料添加剂中狗源性成分的PCR引物就具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于避免现有技术的不足之处而提供一种鉴别检测狗源性成分的PCR检测引物及其试剂盒。以通过PCR扩增准确、快速、可靠的鉴别检测食品、非食用性动物产品、饲料及饲料添加剂等产品中的狗源性成分。

本发明的又一目的在于一种鉴别检测狗源性成分的PCR检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种鉴别检测狗源性成分的PCR检测引物，其主要特点在于：

上游引物GF：5’-GTTATTTGACTGCGTTAGG-3’；

下游引物GR：5’-TGTCAGTATTGTCAGTATCTCC-3’。

一种鉴别检测狗源性成分的PCR检测试剂盒，其主要特点在于包括双蒸水，Mix；上游引物GF：5’-GTTATTTGACTGCGTTAGG-3’；下游引物GR：5’-TGTCAGTATTGTCAGTATCTCC-3’，Taq酶。

一种鉴别检测狗源性成分的PCR检测方法，其主要特点在于，检测步骤如下：

（1）样品采集：

（2）基因组DNA的提取；

（3）PCR反应体系：双蒸水3.4μL、Mix5μL、模版0.4μL、上游引物GF：5’-GTTATTTGACTGCGTTAGG-3’0.4μL、下游引物GR：5’-TGTCAGTATTGTCAGTATCTCC-3’0.4μL；Taq酶0.4μL，10μL体系；

PCR反应条件：98℃预变性1min；98℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸1min，31个循环；72℃延伸10min；

（4）扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测。

本发明的有益效果是：源性成分的检测研究最初从饲料食品行业的畜产品开始，逐渐涉及到各个领域，技术不断提高，范围不断扩大。随着我国畜牧业的发展以及人们生活水平的提高，狗养殖产业应运而生，取得了可观的经济效益，但狗的养殖未能形成规模化饲养，一些不法商贩为获取暴利使用低价动物肉源及副产品以次充好，损害了消费者利益。另外，狗肉检疫程序及质量体系还不完善，存在极大的食品安全隐患。因此，研究出准确、快速、可靠的鉴别狗源性成分的方法和技术，对有效抵御狗源疾病疫病的传播和蔓延以及各行业狗源产品真假鉴别对具有重要的意义。

本发明利用灭菌超纯水对狗DNA模板进行稀释，使其浓度分别降低到110ng/μL、11ng/μL、1.1ng/μL、110pg/μL、11pg/μL、1.1pg/μL、110fg/μL、11fg/μL，然后进行PCR扩增。由PCR产物电泳结果可知，能检测到的最低浓度为：11ng/ul,即该引物的灵敏度是11ng/ul。

本发明具有准确、快速、灵敏度高、成本低等特点。

附图说明：

图1是鸡、鸭、鹅、鹌鹑、鸽子、鹧鸪、马、牛、羊、猪、驴、兔子、鱼、狗等动物的基因组DNA的电泳检测结果图；

图2狗PCR扩增产物电泳图；

图3狗特异性基因片段的PCR检测电泳图；

图4特异性PCR灵敏度验证图。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。