[发明专利]一种尿酸的检测方法及检测试剂盒

说明书

技术领域

 本发明涉及一种尿酸的检测方法，具体地说，涉及一种酶学速率法测定人血清尿酸的检测方法及检测试剂盒，适用于体外定量测定人血清、血浆中的尿酸的浓度，属于医用诊断制剂技术领域。

背景技术

尿酸是嘌呤、核酸和核蛋白的代谢产物。生物细胞中的DNA（脱氧核糖核酸）和RNA（核糖核酸）由核苷酸组成。核酸氧化分解后的产物之一就是嘌呤，所以说嘌呤是细胞的组成成分。体内的老旧细胞，富含嘌呤的食物在体内新陈代谢过程中，其核酸氧化分解产物就有嘌呤。嘌呤会在肝脏中再次氧化为2，6，8--三氧嘌呤又称为尿酸。因此，体内尿酸浓度的异常可指示这些物质代谢的障碍。

体液中尿酸含量变化，可以充分反映出人体内代谢、免疫等机能的状况。正常情况下，体内的尿酸大约有1200毫克，每天新生成约600毫克，同时排泄掉600毫克，处于平衡的状态。血中尿酸全部从肾小球滤过，正常人体内尿酸的生成与排泄速度较恒定。如果体内产生过多来不及排泄或者尿酸排泄机制退化，则体内尿酸滞留过多，当血液尿酸浓度大于7毫克/升，导致人体体液变酸，影响人体细胞的正常功能，长期将会引发痛风。

尿酸增高见于痛风、急性或慢性肾小球肾炎、肾结核、肾盂积水、子痫、慢性白血病、红细胞增多症、摄入过多含核蛋白食物、尿毒症肾炎、肝脏疾患、氯仿和铅中毒、甲状腺功能减低、多发性骨髓瘤、白血病、妊娠反应红细胞增多症。尿酸减低：见于恶性贫血、Fanconi综合征、使用阿司匹林、先天性黄嘌吟氧化酶和嘌吟核苷磷酸化酶缺乏等。

尿酸的测定可作为肾功能、痛风疾病的指标，它在痛风的诊断和肾功能方面有着重要的意义。

测定尿酸主要有磷钨酸法、尿酸酶法（紫外分光法，氧电极法，偶联过氧化物酶比色法，固相酶法）、色谱分析法（高效液相色谱－电化学检测法，反相高效液相色谱法，气相色谱－质谱分析法）等。磷钨酸法特异性、灵敏度较低，目前基本不用。色谱分析法操作繁琐，价格高，对临床的意义不大。尿酸酶法中的紫外分光法特异性强，操作简便，但不易实现自动化分析；氧电极法需要专用的分析设备；固相酶法的酶不稳定，活力不易保存；偶联过氧化物酶比色法灵敏度高、快速、安全、易实现自动化，适应临床的需要, 目前国内使用的基本全部为此方法，但此方法为终点法测定，有一个缺点就是易受血清本底干扰，而且反应时间长，大大影响了结果的准确性和测定效率。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对以上不足，提供一种尿酸的检测方法，用于体外定量测定人血清、血浆中的尿酸的浓度，克服了现有检测方法易受血清本底干扰、反应时间长的缺陷，本发明检测方法以酶催化法，使用酶学速率测定法，完全排除了血清本底的干扰，大大缩短了反应时间，操作简便，结果准确可靠，适用于各种生化分析仪器。

本发明的另一目的是提供一种实施该检测方法的检测试剂盒。

为解决以上问题，本发明采用的技术方案是：一种尿酸的检测方法，其特征在于：所述检测方法为采用酶学速率测定法，根据在波长546nm处，反应体系吸光度的升高速率与样本中尿酸的浓度成正比，延迟30～60秒后，测定30～180秒内的吸光度升高速率，得到尿酸的含量。

一种优化方案，所述吸光度上升速率测定步骤：

a、制备反应液

取空白管、标准管及样本管，分别加入缓冲液；在样本管、空白管及标准管内对应加入待测样本、蒸馏水及标准液，混匀，37℃条件下保温3～5分钟，再加入酶试剂，混匀，得到反应液；或

将缓冲液和酶试剂按比例混合配制成试剂工作液，稳定3～5分钟；然后取空白管、标准管及样本管，分别加入试剂工作液；再分别在样本管、空白管及标准管内对应加入待测样本、蒸馏水及标准液，得到反应液；

b、反应液在37℃条件下反应，延迟30～60秒后，在波长546nm处读取反应液的吸光度变化，读数间隔时间为30～180秒，计算平均每分钟吸光度变化率，得到空白管、标准管及样本管内反应液的每分钟吸光度变化率。

进一步地，所述缓冲液与酶试剂的体积比为5:1～1:1；缓冲液、酶试剂之和与待测样本的体积比为100:1～20:1。  

进一步地，所述缓冲液为含有3.5～8mmol/L N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐（TOOS）的0.4mol/L的磷酸盐缓冲液。

进一步地，所述酶试剂为尿酸酶和过氧化酶溶液，尿酸酶浓度为0.2U/ml～5U/ml；过氧化酶浓度为1～10U/ml。

进一步地，所述标准液为尿酸溶液，浓度为100～400μmol/L。