[发明专利]一种重组肺炎支原体蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程、疫苗研制和诊断试剂等领域，具体地涉及一种肺炎支原体蛋白及其应用。

背景技术

肺炎支原体（Mycoplasmapneumoniae，MP）是引起上呼吸道感染、气管支气管炎及非典型肺炎的常见病原体之一。由于肺炎支原体感染所致的社区获得性肺炎患者临床表现不典型，经过10-20d的潜伏期，可出现一些非特异性症状如头痛和发热，常伴有无力和干咳，根据临床症状不易作出鉴别诊断。常被忽视而导致严重的合并症。由于肺炎支原体无细胞膜，作用于细胞膜的抗菌药物对其无杀伤作用，加上其感染初期临床表现不明显，另外，MP感染还可以造成肺外各系统改变，且有死亡病例的报道，已引起临床关注。因此，及时、有效的进行肺炎支原体感染的实验室诊断变得尤为重要。

MP感染可在任何年龄发生，尤其以5～20岁更多见。MP通过飞沫，以气溶胶微粒的形式传播，感染后引起肺炎支原体肺炎（Mycoplasmalpneumonia，MPP），每隔3～5年出现1次地区性流行，占各类肺炎总数的10%～20%，入伍新兵患肺炎者30%～50%由MP引起，约占非细菌性肺炎的1/3以上。另外，还可以造成肺外各系统改变，且有死亡病例的报道，已引起临床关注。

肺炎支原体肺炎的临床表现、X线征象均缺乏特异性，且须与病毒性肺炎、军团菌肺炎相鉴别，只能通过实验室检查病原体分离阳性和血清学试验进行鉴别诊断、确诊。虽然分离培养虽然是最可靠的确诊依据，但存在着临床标本中病原体含量少、呼吸道污染的杂菌较多、分离培养需要时间长、阳性率低以及支原体培养要求高，一般实验室难以开展等缺点。因而不能作为临床快速诊断的方法。而血清学检查具有简便快速的特性使其在临床上得到广泛应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种重组肺炎支原体蛋白，本发明的另一目的是提供该重组肺炎支原体蛋白在制备检测试剂盒中的应用。

本发明提供了一种编码肺炎支原体蛋白的重组DNA，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。同时提供了由该重组DNA序列编码的肺炎支原体蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

本发明还提供了一种肺炎支原体蛋白的表达载体pET-28a-rMP-p116，它是将SEQIDNO.1所示所述的重组DNA序列插入到质粒pET-28a上得到的重组质粒，其质粒图谱如附图2所示。将表达载体pET-28a-rMP-p116导入大肠杆菌中，得到表达肺炎支原体蛋白的工程菌株，其保藏编号为CGMCCNo.8895，于2014年03月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。

本发明利用SEQIDNO.1所示核苷酸序列通过基因工程方法制备肺炎支原体蛋白可以通过如下步骤实现：

1）获得具有SEQIDNO.1所示的核苷酸序列；

2）将该核苷酸序列导入质粒，优选pET-28a质粒；

3）将该质粒导入原核宿主细胞，优选大肠杆菌宿主细胞，更优选BL21（DE3）菌株中；

4）在有利于所述核苷酸序列表达的条件下（转速200r/min、37℃培养3小时，加入1mmol/mL诱导剂，转速200r/min、37℃诱导表达5小时）培养所述宿主细胞；

5）回收、纯化及复性所表达的重组蛋白。

本发明提供的检测肺炎支原体感染的试剂盒，其组分中的抗原是本发明所述的重组肺炎支原体蛋白。优选地，用于标记肺炎支原体蛋白的标记物为体金。

本发明所述的采用胶体金标记抗原的试剂盒中，MP抗原划线包被浓度为1.0mg/ml，MP抗原胶体金复合物在浓缩原液到稀释一倍之间包被载金垫，胶体金结合物喷点量为60.0μL/cm²。兔抗MP抗体包被量为1.0μl/cm，包被浓度为5.0mg/ml。

以下将更详细的描述本发明的技术方案：

本发明提供了一种编码肺炎支原体蛋白的如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列，利用该核苷酸序列制备肺炎支原体蛋白的方法，由该方法制备的包含SEQIDNO.2所示氨基酸序列的肺炎支原体蛋白，以及包含该蛋白的组合物和试剂盒，同时还公开了它们在检测肺炎支原体感染的应用。