[发明专利]一种中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法

权利要求书

1.一种中药组合物制剂中多种成分含量的测定方法，该中药组合物由下列重量份数的原料药制成：人参45-180份、麦冬50-200份、山茱萸125-450份、丹参125-450份、炒酸枣仁95-400份、桑寄生95-400份、赤芍45-200份、土鳖虫35-150份、甘松45-200份、黄连25-90份、南五味子35-150份、龙骨75-300份，采用HPLC-ESI-MS法定量测定所述中药组合物中的多种成分，其特征在于该测定方法由以下步骤组成：

A、供试品溶液的制备：称取该中药组合物制剂0.2-0.5g，加入甲醇，超声处理30min，再用甲醇补足，过滤，即得；

B、对照品溶液的制备：分别称取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B、人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1 、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2对照品，加甲醇溶解，摇匀，得到各对照品的储备液，各对照品的储备液用体积比为70:30的甲醇-水进行稀释，分别得到不同浓度的各对照品溶液；

C、液相条件：色谱柱： C18,柱温：25°C，流动相：乙腈和0.1%甲酸水溶液，流速：0.8毫升/min，梯度洗脱：0-5min，20 - 25% 乙腈,80-75%的0.1%甲酸水溶液；5 – 15min，25 -95% 乙腈,75-5%的0.1%甲酸水溶液；15 – 21min，95 - 95% 乙腈，5-5%的0.1%甲酸水溶液，平衡色谱柱6min，进样量：10μL；

质谱条件：离子源：电喷雾离子源，扫描方式：正负离子扫描模式，测定过程分为5个阶段，0.0 - 10.21min：黄连碱、小檗碱、表小檗碱、盐酸小檗碱、巴马汀、马钱苷、芍药苷、莫诺苷和人参皂苷9种化合物采用正离子模式检测。10.21 - -10.24min，正离子模式转换成负离子模式；10.24 - -14.24min：槲皮素、丹酚酸A、丹酚酸B、人参皂苷Rb1、 人参皂苷Rd、人参皂苷 Re、人参皂苷 Rf、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg2和三七参苷R1在负离子模式下检测。随后0.03分钟内，负离子模式再次转换成正离子模式。剩余的四个化合物，五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲和丹参酮IIA在正离子模式下检测；

氮气应用于整个分析过程，正负离子喷雾电压分别为：5500KV、-4500KV，涡轮增压机喷淋温度：650°C，雾化气压：60psi，辅助气压：65 psi。气帘气压：25 psi，采用多重反应监测(MRM)模式，碰撞池入口电压：10.0/-10.0V，碰撞池出口电压：3.0/-5.0V；

D、标准曲线的制定及计算结果：将不同浓度的各对照品溶液注入HPLC中，以色谱峰面积积分值为纵坐标，浓度为横坐标，绘制各对照品的标准曲线；将供试品溶液注入HPLC中，将各峰面积积分值代入到标准曲线中，得到盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、马钱苷、芍药苷、斯皮诺素、槲皮素、丹参酸B,人参皂苷Rb1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、丹参酮IIA、五味子甲素、五味子醇甲、五味子酯甲、黄连碱、表小檗碱、莫诺苷、丹参酸A、人参皂苷 Rd、小檗碱和人参皂苷Rg2的含量。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于所述步骤A中用0.22μm滤膜过滤，

所述步骤C中色谱柱的规格为4.6 mm×250 mm, 5 μm。

3.根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于该中药组合物由下列重量份数的原料药制成：

人参89份、麦冬112份、山茱萸224份、丹参224份、炒酸枣仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、土鳖虫75份、甘松89份、黄连45份、南五味子67份、龙骨149份。

4.根据权利要求1-2任一项所述的测定方法，其特征在于该中药组合物由下列重量份数的原料药制成：

人参45份、麦冬112份、山茱萸224份、丹参225份、炒酸枣仁186份、桑寄生186份、赤芍89份、甘松45份、土鳖虫35份、黄连45份、南五味子67份、龙骨149份。