[发明专利]一种尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的超高效液相色谱测定方法

权利要求书

1.一种尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的超高效液相色谱（UPLC）测定方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：

a、收集志愿者尿液；

b、样品前处理：室温下解冻尿液样品，混合均匀后，经过0.22 μm的水相滤膜过滤，取1.0 mL的尿液，加入1.0 mL 6 mol/L的盐酸和4.0 mL由二氯甲烷：异丙醇按9:1配成的混合萃取溶液，以2000 r/min振荡提取3分钟，10000 r/min离心1分钟，取下层有机相1.0 mL，于40℃氮吹至干，加入0.2 mL0.01%混合酸水溶液复溶，取5 μL引入超高效液相色谱仪分离分析；

c、标准工作液配制：用纯水配制不同浓度的苯乙醛酸和苯乙醇酸混合标准工作溶液；

d、超高效液相色谱（UPLC）测定，吸取配制好的不同浓度的苯乙醛酸和苯乙醇酸混合标准工作溶液，注入超高效液相色谱系统，苯乙醛酸和苯乙醇酸的线性回归方程分别为y = 1.12×10⁵x+1.36×10⁴和y = 1.94×10⁴x－2.48×10³，其中y代表目标分析物的峰面积，x表示尿液中目标分析物的浓度，标准曲线的相关系数均大于0.9990，对样品待测液进行测定，得到分析物的色谱峰面积，代入一元线性回归方程，求得样品待测液中分析物的含量。

2.根据权利要求1所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的超高效液相色谱（UPLC）测定方法，其特征在于：苯乙醛酸和苯乙醇酸混合标准工作溶液浓度分别为0.085，0.17，0.425，0.85，4.25和8.5 μg/mL和0.25，0.5，1，2，10和20 μg/mL。

3.根据权利要求1所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的超高效液相色谱（UPLC）测定方法，其特征在于：选取Waters ACQUITY UPLC^? BEH色谱柱，规格50 mm×2.1 mm，1.7 μm；流动相体系为甲醇：0.01%混合酸水溶液，两者比例为15:85，等度洗脱；流动相流速为150 μL/min；分析时间为8 min；进样量为5 μL。

4.根据权利要求1所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的超高效液相色谱（UPLC）测定方法，其特征在于：超高效液相色谱检测器条件：光电二极管阵列检测器，检测波长：225 nm、254 nm；柱温箱温度：30℃。

5.根据权利要求3所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的超高效液相色谱（UPLC）测定方法，其特征在于：所述0.01%混合酸水溶液的配制方法为：吸取醋酸、85%磷酸各1.0 mL稀释至100 mL容量瓶中，置冰箱存放，用时取10mL用水稀释至1L，即为0.01%混合酸水溶液。