[发明专利]一种液相色谱串联质谱方法在大规模吸烟人群样本生物监测3-2-羟乙基腺嘌呤的应用有效
申请号: | 201410093902.4 | 申请日: | 2014-03-14 |
公开(公告)号: | CN103822988A | 公开(公告)日: | 2014-05-28 |
发明(设计)人: | 田永峰;胡清源;王安;侯宏卫;刘勇;杨进;陈欢;韩书磊;刘彤;张小涛;石龙凯;刘洋 | 申请(专利权)人: | 国家烟草质量监督检验中心;中国科学院合肥物质科学研究院 |
主分类号: | G01N30/02 | 分类号: | G01N30/02 |
代理公司: | 郑州中民专利代理有限公司 41110 | 代理人: | 姜振东 |
地址: | 450001 *** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 色谱 串联 方法 大规模 吸烟 人群 样本 生物 监测 乙基 嘌呤 应用 | ||
1.一种液相色谱串联质谱方法在大规模吸烟人群样本生物监测3-2-羟乙基腺嘌呤的应用,其特征在于:包括以下具体过程:
(1)取样,招募吸烟者、非吸烟者志愿者,对志愿者进行筛选,采集入选志愿者24小时排泄的全部尿液收集存放于5L的聚丙烯桶中,每一志愿者尿液分别存放于-80℃超低温冰箱中保存;
(2)逐一对志愿者尿液进行处理、测定,得到每一个志愿者尿液样品中3-2-羟乙基腺嘌呤的含量;
(3)将每一志愿者尿液样品的测定数据输入数据分析软件进行分析处理,找出吸烟者尿液中3-2-羟乙基腺嘌呤的含量规律。
2.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱方法在大规模吸烟人群样本生物监测3-2-羟乙基腺嘌呤的应用,其特征在于:对志愿者尿液进行处理、测定的具体步骤如下:
a、样品前处理:尿液在室温状态下解冻并混合均匀,取4 mL尿液,加入4mL超纯水,加入100 μL内标,用水浴锅调节温度到75-85℃,取超纯水稀释至8 mL后的尿液置于固相萃取柱中;
固相萃取用Waters Oasis MCX固相萃取柱,预先用2 mL甲醇、5 mL水溶液活化,上样量为8 mL,用2 mL 10%甲醇/水溶液淋洗,然后用1 mL乙酸乙酯淋洗,最后用甲醇/乙酸乙酯/氨水混合液洗脱,收集洗脱液并于60 ℃下用氮气吹至干,然后用100 μL水溶液溶解,供LC-MS/MS分离分析;
b、标准工作液的配制:用乙腈配制不同浓度的3-2-羟乙基腺嘌呤(3-HOEtA)标准工作溶液;
c、液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定,吸取配制好的不同浓度的3-2-羟乙基腺嘌呤(3-HOEtA)的标准工作溶液,注入LC-MS/MS系统,得到线性回归方程,对样品待测液进行测定,测得分析物与内标峰面积的比值,代入一元线性回归方程,求得样品待测液中分析物的含量。
3.根据权利要求2所述的液相色谱串联质谱方法在大规模吸烟人群样本生物监测3-2-羟乙基腺嘌呤的应用,其特征在于:所述内标为氘代-3-乙基腺嘌呤,内标浓度为100 ng/mL。
4.根据权利要求2所述的液相色谱串联质谱方法在大规模吸烟人群样本生物监测3-2-羟乙基腺嘌呤的应用,其特征在于:所述甲醇/乙酸乙酯/氨水混合液的具体配比为47.5: 47.5: 5。
5.根据权利要求2所述的液相色谱串联质谱方法在大规模吸烟人群样本生物监测3-2-羟乙基腺嘌呤的应用,其特征在于:在c步骤中,选取了Waters HILIC色谱柱,规格150 mm x 2.1 mm,2.5 μm,流动相体系选取A:乙腈和B: 10m mol/L甲酸铵/水溶液,A:B为95:5。
6.根据权利要求5所述的液相色谱串联质谱方法在大规模吸烟人群样本生物监测3-2-羟乙基腺嘌呤的应用,其特征在于:洗脱条件:流动相A: 乙腈和B: 10m mol/L甲酸铵/水溶液,A:B为95:5,pH 4.0;流速0.25 mL/min;柱温25 °C;进样量3 μL,洗脱时间:0 ~ 20 min。
7.根据权利要求2所述的液相色谱串联质谱方法在大规模吸烟人群样本生物监测3-2-羟乙基腺嘌呤的应用,其特征在于:质谱条件:电喷雾离子源,正离子扫描方式;喷雾电压为5500 V;雾化气压力为344.5 kPa;气帘气压力为206.7 kPa;辅助雾化气压力为310.0 kPa;离子源温度为500℃;去蔟电压为85 eV;碰撞能为26 eV;驻留时间为40 ms,监测离子对为3- HOEtA:180→136定量离子对,180→119定性离子对;内标氘代-3-乙基腺嘌呤为169→137。
8.根据权利要求1所述的液相色谱串联质谱方法在大规模吸烟人群样本生物监测3-2-羟乙基腺嘌呤的应用,其特征在于:过程(3)中所述的数据分析软件为Office excel或SPSS统计分析软件。
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