[发明专利]一种早期检测杨梅是否发生凋萎病的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物疾病诊断领域，特别的属于一种早期检测杨梅是否发生凋萎病的方法。

背景技术

杨梅（Myrica rubra Sieb.Et Zucc.）是我国南方特有的珍稀水果，果实甜酸适口，风味独特，在国内外享有盛誉，因其显著的经济与生态效益，已成为浙江省主要水果种类，其产值已稳居各类水果首位。杨梅凋萎病是近年来新发现的一种病害，发病初期杨梅部分嫩梢干枯，随病情加重，嫩梢干枯数量逐渐增多并蔓延至全树，发病后3-5年整株死亡。杨梅凋萎病在浙江省杨梅主产区呈迅速蔓延趋势，严重影响杨梅产业的可持续发展（求盈盈等2011）。杨梅凋萎病病原菌为异色拟盘多毛孢（Pestalotiopsis versicolor）和小孢拟盘多毛孢（P.microspora），病菌主要定殖于杨梅枝干以及枝的韧皮部。

一般，在杨梅出现枯枝或者出现大量枯枝的时候，在杨梅发病的组织中已经存在大量的病原菌。这个时候，如果采取施加药剂进行防治，已经起不到很好的效果。这就需要早期进行杨梅凋萎病菌的检测，提早进行凋萎病的有效进行防治，减少损失。

发明内容

本发明提供一种早期检测杨梅是否发生凋萎病的方法，该方法包括：对杨梅的组织的DNA进行定量扩增，如果每100ng的植物组织DNA中可以检测的异色拟盘多毛孢或/和小孢拟盘多毛孢的拷贝数大于1X10⁶，则表示该杨梅树在将来一定会发生凋萎病，如果每100ng的植物组织DNA中可以检测的异色拟盘多毛孢或/和小孢拟盘多毛孢的拷贝数小1X10⁵，则表示该杨梅树在将来不会发生凋萎病。

在一些优选的方式中，如果每100ng的植物组织DNA中可以检测的异色拟盘多毛孢或/和小孢拟盘多毛孢的拷贝数大于1X10⁷、1X10⁸或1X10⁹，则表示该杨梅树在将来一定会发生凋萎病。

在一个优选的方式中，植物组织为杨梅树一年生嫩枝中的组织。定量扩增的方法为荧光RT-PCR。

在另一个优选的方式中，所述的杨梅的凋萎病由异色拟盘多毛孢或/和小孢拟盘多毛孢菌所造成的。优选的，所述的杨梅的凋萎病由保藏号为CGMCC No.8714的异色拟盘多毛孢菌株PVXJ1或/和保藏号码为CGMCC No.8713的小孢拟盘多毛孢PMYS1菌株所引起的。

在优选的方式中，检测所用的引物为GAAATGACGCTCGAACAGGC和TGAAGAACGCAGCGAAATGC；或引物对为GAACAGGCATGCCCACTAGA和ATCGATGAAGAACGCAGCGA。

在一些优选的方式中，一旦发现每100ng的植物组织DNA中可以检测的异色拟盘多毛孢或/和小孢拟盘多毛孢的拷贝数大于1X10⁶，立即对杨梅树进行药物防治。如果每100ng的植物组织DNA中可以检测的异色拟盘多毛孢或/和小孢拟盘多毛孢的拷贝数小1X10⁵，不需要对杨梅树进行药物防治，进行正常的田间管理。

对于保藏真菌的生物学特性说明

菌株PVXJ1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号码为CGMCC No.8714，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，拉丁学名：Pestalotiopsis versicolor，中文名称为：异色拟盘多毛孢，保藏日期为：2014年01月10日。

第二个菌株PMYS1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号码为CGMCC No.8713，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，拉丁学名：Pestalotiopsis microspora，中文名称为：小孢拟盘多毛孢，保藏日期为：2014年01月10日。

附图说明

图1为本发明实用的拷贝数与CT值的标准曲线；

图2标准品的扩增曲线图；

图3标准品的溶解曲线图。

有益效果

使用本发明的方法，可以早起鉴定杨梅树是否具有发生凋萎病的风险，通过DNA的拷贝数的多少预测杨梅树凋萎病的发生风险，可以提前预测凋萎病的发生，采取及时有效的防治措施。

具体实施方式

1材料和方法

1.1样品采集及预处理

1.2试剂