[发明专利]一种早期检测杨梅是否发生凋萎病的方法有效
申请号: | 201410085999.4 | 申请日: | 2014-03-10 |
公开(公告)号: | CN104846064B | 公开(公告)日: | 2017-06-30 |
发明(设计)人: | 任海英;戚行江;梁森苗;郑锡良;张振兰;朱潇婷 | 申请(专利权)人: | 浙江省农业科学院 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645 |
代理公司: | 浙江杭州金通专利事务所有限公司33100 | 代理人: | 向庆宁 |
地址: | 310021 *** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 早期 检测 杨梅 是否 发生 凋萎 方法 | ||
技术领域
本发明属于植物疾病诊断领域,特别的属于一种早期检测杨梅是否发生凋萎病的方法。
背景技术
杨梅(Myrica rubra Sieb.Et Zucc.)是我国南方特有的珍稀水果,果实甜酸适口,风味独特,在国内外享有盛誉,因其显著的经济与生态效益,已成为浙江省主要水果种类,其产值已稳居各类水果首位。杨梅凋萎病是近年来新发现的一种病害,发病初期杨梅部分嫩梢干枯,随病情加重,嫩梢干枯数量逐渐增多并蔓延至全树,发病后3-5年整株死亡。杨梅凋萎病在浙江省杨梅主产区呈迅速蔓延趋势,严重影响杨梅产业的可持续发展(求盈盈等2011)。杨梅凋萎病病原菌为异色拟盘多毛孢(Pestalotiopsis versicolor)和小孢拟盘多毛孢(P.microspora),病菌主要定殖于杨梅枝干以及枝的韧皮部。
一般,在杨梅出现枯枝或者出现大量枯枝的时候,在杨梅发病的组织中已经存在大量的病原菌。这个时候,如果采取施加药剂进行防治,已经起不到很好的效果。这就需要早期进行杨梅凋萎病菌的检测,提早进行凋萎病的有效进行防治,减少损失。
发明内容
本发明提供一种早期检测杨梅是否发生凋萎病的方法,该方法包括:对杨梅的组织的DNA进行定量扩增,如果每100ng的植物组织DNA中可以检测的异色拟盘多毛孢或/和小孢拟盘多毛孢的拷贝数大于1X106,则表示该杨梅树在将来一定会发生凋萎病,如果每100ng的植物组织DNA中可以检测的异色拟盘多毛孢或/和小孢拟盘多毛孢的拷贝数小1X105,则表示该杨梅树在将来不会发生凋萎病。
在一些优选的方式中,如果每100ng的植物组织DNA中可以检测的异色拟盘多毛孢或/和小孢拟盘多毛孢的拷贝数大于1X107、1X108或1X109,则表示该杨梅树在将来一定会发生凋萎病。
在一个优选的方式中,植物组织为杨梅树一年生嫩枝中的组织。定量扩增的方法为荧光RT-PCR。
在另一个优选的方式中,所述的杨梅的凋萎病由异色拟盘多毛孢或/和小孢拟盘多毛孢菌所造成的。优选的,所述的杨梅的凋萎病由保藏号为CGMCC No.8714的异色拟盘多毛孢菌株PVXJ1或/和保藏号码为CGMCC No.8713的小孢拟盘多毛孢PMYS1菌株所引起的。
在优选的方式中,检测所用的引物为GAAATGACGCTCGAACAGGC和TGAAGAACGCAGCGAAATGC;或引物对为GAACAGGCATGCCCACTAGA和ATCGATGAAGAACGCAGCGA。
在一些优选的方式中,一旦发现每100ng的植物组织DNA中可以检测的异色拟盘多毛孢或/和小孢拟盘多毛孢的拷贝数大于1X106,立即对杨梅树进行药物防治。如果每100ng的植物组织DNA中可以检测的异色拟盘多毛孢或/和小孢拟盘多毛孢的拷贝数小1X105,不需要对杨梅树进行药物防治,进行正常的田间管理。
对于保藏真菌的生物学特性说明
菌株PVXJ1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号码为CGMCC No.8714,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,拉丁学名:Pestalotiopsis versicolor,中文名称为:异色拟盘多毛孢,保藏日期为:2014年01月10日。
第二个菌株PMYS1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏号码为CGMCC No.8713,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,拉丁学名:Pestalotiopsis microspora,中文名称为:小孢拟盘多毛孢,保藏日期为:2014年01月10日。
附图说明
图1为本发明实用的拷贝数与CT值的标准曲线;
图2标准品的扩增曲线图;
图3标准品的溶解曲线图。
有益效果
使用本发明的方法,可以早起鉴定杨梅树是否具有发生凋萎病的风险,通过DNA的拷贝数的多少预测杨梅树凋萎病的发生风险,可以提前预测凋萎病的发生,采取及时有效的防治措施。
具体实施方式
1材料和方法
1.1样品采集及预处理
1.2试剂
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