[发明专利]生产具有纤维素内切酶和葡糖苷酶双活性蛋白的酵母菌株及其构建有效
| 申请号： | 201410084775.1 | 申请日： | 2014-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN103820443A | 公开（公告）日： | 2014-05-28 |
| 发明（设计）人： | 薛栋升;汪江波;周敏 | 申请（专利权）人： | 湖北工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 武汉科皓知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 42222 | 代理人： | 张火春 |
| 地址： | 430068 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 生产 具有 纤维素 内切酶 葡糖 苷酶双 活性 蛋白 酵母 菌株 及其 构建 | ||
1.用于构建生产具有纤维素内切酶和葡糖苷酶双活性蛋白的酵母菌株的DNA片段，其特征在于：包括按顺序排列的酿酒酵母TDH3启动子序列、酿酒酵母分泌信号肽编码序列、具有纤维素内切酶和葡糖苷酶活性的序列、酿酒酵母TDH3终止子序列。
2.根据权利要求1所述的DNA片段，其特征在于：所述的序列分别如SEQ ID NO.1～4所示。
3.根据权利要求1所述的DNA片段，其特征在于：所述的DNA片段的序列如SEQ ID NO.5所示。
4.用于构建生产具有纤维素内切酶和葡糖苷酶双活性蛋白的酵母菌株的质粒，其特征在于：为包含权利要求1-3任一项所述的DNA片段的真核表达质粒。
5.根据权利要求4所述的质粒，其特征在于：所述的真核表达质粒为pPIC9K质粒。
6.根据权利要求4所述的质粒，其特征在于通过包含如下步骤的方法制备得到：合成两端有限制性内切酶识别位点含有权利要求1-3任一项所述的DNA片段的序列，通过限制性内切酶连接到真核表达质粒上。
7.根据权利要求6所述的质粒，其特征在于：所述的真核表达质粒为pPIC9K质粒时，限制性内切酶为AatⅡ和NotⅠ。
8.一种生产具有纤维素内切酶和葡糖苷酶双活性蛋白的酵母菌株，其特征在于：包含权利要求4-7任一项所述的质粒。
9.根据权利要求8所述的酵母菌株，其特征在于：所述的酵母菌株为酵母菌株SMD1168。
10.权利要求8或9所述的酵母菌株的构建方法，其特征在于包括如下步骤：制备酵母电转化感受态细胞，将权利要求4-7任一项所述的质粒通过电转化转进酵母中得到。
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