[发明专利]一种土鳖虫多糖的提取方法、提取的多糖以及该多糖的用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种土鳖虫多糖的提取方法，利用该方法提取的土鳖虫多糖，以及该多糖在抗血小板聚集方面的用途。 

背景技术

中药土鳖虫为鳖蠊科昆虫地鳖或冀地鳖的干燥体，主产福建、河北、广西、广东、山东等地，具有破血逐瘀，续筋接骨等功效，是一种重要的传统中药。现代药理研究表明土鳖虫具有溶栓、抗凝血、抗肿瘤、调节血脂等作用。其主要成分包括多种活性蛋白、氨基酸、不饱和脂肪酸、微量元素、生物碱和脂溶性维生素等物质，而对土鳖虫多糖的提取和用途鲜有报道。 

现有多糖的提取方法主要有水提醇沉法、微波法、酸碱法等。但微波法、酸碱法等具有设备要求高、酸碱破坏原有多糖结构、后处理繁琐等缺点。 

现在，也出现了一种酶处理法。例如有文献报道了利用木瓜蛋白酶对土鳖虫进行处理，进而对多糖进行提取，但是利用木瓜蛋白酶处理后的土鳖虫提取物中多糖含量较低。 

而且，现在土鳖虫在传统的中药中，用途为：破瘀血，续筋骨，用于筋骨折伤，瘀血经闭，症瘕痞块。 

因此，有待于提供一种更为先进、合理的提取方法，以提高土鳖虫多糖提取量，并对提取的多糖进行功能研究。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种土鳖虫多糖的提取方法、提取的多糖以及该多糖的用途，从而消除上述背景技术中缺陷。 

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是： 

一种土鳖虫多糖的提取方法，步骤如下： 

（1）脱脂：将干燥土鳖虫雌体粉碎，过筛，加入溶剂脱脂，回流2～5次，每次1～3小时，抽滤，滤渣挥干溶剂待用； 

（2）超声处理：将步骤（1）所得滤渣浸泡于30～50倍重量的蒸馏水中， 以200～400W功率超声处理15～45分钟，得到固液混合体； 

（3）酶处理：将步骤（2）所得的固液混合体调整pH为3～6，然后用复合酶在温度45～65℃，料液比为1:20～1:40条件下水解40～90分钟，然后升温至85℃灭酶，抽滤，收集滤液，浓缩，得到浓缩提取液，这里的料液比是指固体质量（g）与液体的体积（ml）比； 

（4）醇沉：将步骤（3）所得浓缩提取液加入乙醇，使乙醇在体系中最终浓度为80wt%，放置24小时析出土鳖虫粗多糖沉淀，抽滤，用95wt%乙醇和丙酮洗涤两次，50～70℃真空干燥，得到土鳖虫多糖。 

作为一种改进，所述步骤（1）中，将干燥土鳖虫雌体粉碎后过40目筛。 

作为一种改进，所述步骤（1）中，溶剂为石油醚，且用量为过筛后固体的10倍重量。 

作为一种改进，所述步骤（2）中，滤渣浸泡于40倍体积的蒸馏水中超声处理，超声功率为300W，超声时间为30分钟。 

作为一种改进，所述步骤（3）中，利用HAc-NaAc缓冲溶液调整pH。 

作为一种改进，所述步骤（3）中，控制pH为4.5，温度为45℃，保温时间为90分钟。 

作为一种改进，所述步骤（3）中，复合酶为胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰蛋白酶，其重量分别为滤渣重量的1.5%～2.0%、1.5%～2.0%和1.5%～2.0%。 

发明人在研究中发现，将得到的土鳖虫粗多糖进行动物体外、体内抗血小板聚集实验，可以明显地抑制由ADP、AA、PAF、胶原、凝血酶诱导的血小板聚集，并做了相关的动物体内、体外实验，证明本发明得到的土鳖虫粗多糖能够在抑制血小板聚集方面得以应用。 

为了更好的说明该用途，发明人通过药理实验及结果进行如下描述，下述的土鳖虫多糖均采用本发明提供的制备方法制备。 

以下为体外动物实验： 

雄性健康家兔，实验前12h禁食。戊巴比妥耳缘静脉注射麻醉，颈总动脉取血，以3.8%枸橼酸钠抗凝（体积比9:1）。离心分离富血小板血浆（PRP）和贫血小板血浆（PPP），用PPP调整PRP浓度为5×108cell/mL。血小板聚集仪以PPP调零，PRP于37℃温育5分钟，加入ADP（或AA或PAF或胶原或凝血 酶）溶液，磁子搅拌下记录5min内血小板聚集曲线及最大聚集率。每个实验重复6次。