[发明专利]三角褐指藻和小新月菱形藻混合培养的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种三角褐指藻和小新月菱形藻混合培养高产技术的培养基，其特征在于：其配方如下：NH₄NO₃20毫克，NaNO₃6毫克，尿素3毫克，KH₂PO₄1.5毫克，Na₂SiO₃10毫克，NaHCO₃400毫克，九二0植物生长刺激素7国际单位，蛋白胨6毫克，琼脂5毫克，麦芽糖8毫克，蔗糖10毫克，山梨酸钾12毫克，葡萄糖45毫克，海藻酸丙二醇酯20毫克，环己基氨基磺酸钠13毫克，蜂胶6毫克，乳酸钠-L6毫克，麦芽糖醇10毫克，硬脂酰乳酸钠5毫克，焦磷酸铁3毫克，柠檬酸钾5毫克，乙酸钠6毫克，山梨糖醇液1.5毫升，三聚甘油单硬脂酸酯8毫克，人尿1.5毫升，海泥抽取液1.2毫升，土壤抽出液2.5毫升，牛粪浸出液2毫升，羊粪浸出液1.5毫升，f／2微量元素溶液1.4毫升，f／2维生素溶液1.2毫升，煮沸冷却后的纯净海水1000毫升； 

其中f／2微量元素溶液配方：ZnSO₄·4H₂O23毫克，MnCl₂·4H₂O178毫克，CuSO₄·5H₂O10毫克，FeC₆H₅O₇·5H₂O3.9克，Na₂MoO₄·2H₂O7.3毫克，CoCl₂·6H₂O12毫克，Na₂EDTA4.35克，蒸馏水1000毫升。 

f／2维生素溶液配方：维生素B₁₂0.5毫克，维生素B₁100毫克，维生素H0.5毫克，蒸馏水1000毫升。 

2.一种三角褐指藻和小新月菱形藻混合高产培养方法，其特征在于具体步骤如下： 

培养容器为家庭用的矿泉水桶，容积20升，无色透明或浅天蓝色，洗刷干净，后用蒸馏水润洗3遍，用漏斗装入权利要求1所述的培养基12升，充分摇匀5分钟，选择生命力旺盛、无污染的三角褐指藻和小新月菱形藻藻液分别进行接种，先接种三角褐指藻，接种密度6×10⁴cell／mL，再接种小新月菱形藻，接种密度8×10⁴cell／mL，接种后轻轻摇动矿泉水桶5分钟，使两种藻混合均匀；瓶口插入两根干净玻璃管，一根较长，顶端露出瓶口7-10厘米，下端插入较深，离瓶底5厘米，用以充气；另一根较短，16厘米，两端露出瓶口即可，用以排气；两根玻璃管同样粗细，直径6毫米；最后用酒精棉球擦拭瓶口，用干净的透明胶带封口并将两根玻璃管固定；长的玻璃管上端用料管与充气泵相连，充入混合气体，混合气体成分和体积比例是空气∶纯二氧化碳∶臭氧∶一氧化氮＝90％∶8％∶1％∶1％；充气量不宜太大，以藻细胞浮起不下沉即可；室内培养，空调控温，最佳温度23±2℃，日光灯照射，光照强度12000-15000lux，光／暗周期为16L／8D，即光照16小时，黑暗8小时；培养至第6天，停止充气，揭开透明胶带，用漏斗从瓶口加入3升新鲜培养基，胶带重新封口，充气，继续培养，至第9天，三角褐指藻和小新月菱形藻密度分别增加至3500×10⁴cell／mL和1000×10⁴cell／mL，停止培养，从瓶口倒出藻液，将矿泉水桶洗刷干净后，加入中药消毒液消毒10-30分钟，后进入下一轮培养； 

所述中药消毒液：由以下重量比的物质组成：黄芩7-10份、黄秋葵粉3-5份、鱼腥草3-5份、丹参5-10份、牛黄5-10份；将上述药材放入可加热的容器中，加入3-5倍体积的纯净水，煮沸后持续煮30-50分钟，后过滤，沉淀1-2小时，后取澄清液即可；所述黄秋葵粉是清洗干净并烘干后的黄秋葵茎叶、花及籽粒经超微粉碎机粉碎至250目，然后搅匀、灭菌所得。 

3.根据权利要求2所述的一种三角褐指藻和小新月菱形藻混合高产培养方法，其特征在于：对选用的所述的矿泉水桶，洗刷干净后进行消毒，使用紫外灯消毒，消毒10-20分钟。