[发明专利]一种克伦特罗半抗原与抗原及其专用化学发光免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种克伦特罗半抗原与抗原及其专用化学发光免疫试剂盒。

背景技术

克伦特罗（CL）属于苯乙醇胺类β-兴奋剂，临床医学中主要用于扩张支气管和增加肺通气量，可治疗支气管哮喘、阻塞性肺炎、平滑肌痉挛和休克等症，在兽医临床中用作牛、马的产道松弛剂。近年来，克伦特罗作为饲料添加剂，在畜牧业非法使用的情况越来越严重。

多数国家都禁止在动物生产过程中使用克伦特罗。有些国家执行最高残留量（MRLs）限制，如英国规定的MRLs为0.5ng/g，荷兰规定的MRLs为1ng/g。我国明确规定禁止CL及其制剂在食品动物的饲养过程中使用。

目前检测克伦特罗的方法主要有高效液相色谱法（HPLC-UV）﹑气-质联机法（GC-UV）和液-质联机等。这些方法都在不同程度地存在着处理过程繁琐、净化效果差、有机溶剂浪费多、所需时间长等缺点。

发明内容

本发明的目的是提供一种克伦特罗半抗原与抗原及其专用化学发光免疫试剂盒。

本发明提供的半抗原，为式（Ⅰ）所示的化合物；

式（Ⅰ）所示的化合物具体可为按如下方法制备得到的化合物：（1）取200mg盐酸克伦特罗、166mg碳酸钾和15ml DMF，搅拌混匀，然后加入77μL4-溴丁酸，90℃搅拌3h，自然冷却至室温，加入50ml蒸馏水，用1M盐酸水溶液调pH至6.0；（2）取步骤（1）得到的溶液，用乙酸乙酯萃取2次（每次可采用50ml乙酸乙酯），合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤并收集滤液，将滤液进行真空干燥，得到的干物质即为式（Ⅰ）所示的化合物。

本发明还保护式（Ⅰ）所示的化合物与载体蛋白的偶联物（该偶联物为免疫原或包被原）。所述载体蛋白具体可为BSA或OVA。

本发明还保护一种用于检测克伦特罗或克伦特罗衍生物的试剂盒，包括所述偶联物。所述试剂盒还可包括以所述偶联物为免疫原得到的抗体。所述抗体具体可为兔源多克隆抗体。

本发明还保护一种用于检测克伦特罗或克伦特罗衍生物的化学发光免疫试剂盒，包括包被有所述偶联物的化学发光微孔板（偶联物作为包被原）。所述试剂盒还可包括以所述偶联物为免疫原得到的抗体。所述抗体具体可为兔源多克隆抗体。

所述“包被有所述偶联物的化学发光微孔板”的制备方法具体如下：（1）取所述偶联物，用包被缓冲液稀释（包被缓冲液具体可为pH9.6、0.03M的碳酸盐缓冲液），得到包被原稀释液（蛋白浓度具体可为2ng/mL）；（2）将包被原稀释液加入化学发光微孔板（具体可100μL/孔），孵育（具体可37℃孵育16小时），洗涤，拍干；（3）完成步骤（2）后，进行封闭（每孔可加入200μL封闭液，37℃温育2h；封闭液的具体配方：将10g牛血清白蛋白、0.1mL proclin300和1000mL pH7.4、0.01M的磷酸盐缓冲液混合，得到封闭液），倾去孔内的液体，干燥。

本发明还保护以上任一所述试剂盒在检测待测样本中是否含有克伦特罗或克伦特罗衍生物中的应用。

以上任一所述的克伦特罗衍生物具体可为盐酸克伦特罗。

本发明提供的试剂盒操作简便、特异性好、灵敏度高，各项性能优良，非常适于推广应用。

附图说明

图1为标准曲线图。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例1中的搅拌都是采用磁力搅拌器进行的。二甲基甲酰胺(DMF)：sigma,型号：D4551。1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)：sigma，型号：165344。N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)：sigma,型号：56480。盐酸克伦特罗：sigma,型号：54969。

克伦特罗的结构式如下：

实施例1、免疫原和包被原的制备

一、半抗原的制备

1、取200mg盐酸克伦特罗、166mg碳酸钾和15ml DMF，搅拌混匀，然后加入77μL4-溴丁酸，90℃搅拌3h，自然冷却至室温，加入50ml蒸馏水，用1M盐酸水溶液调pH至6.0。

2、取步骤1得到的溶液，用乙酸乙酯萃取2次（每次采用50ml乙酸乙酯），合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤并收集滤液，将滤液进行真空干燥，得到的干物质即为半抗原。

半抗原的结构式见式（Ⅰ）。