[发明专利]一种番鸭细小病毒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于家禽病源微生物筛选技术领域，具体涉及一种番鸭细小病毒及其在制备疫苗、抗体中的应用。

背景技术

番鸭细小病毒病是侵害雏番鸭的一种急性或亚急性传染病，是以喘气、腹泻及胰脏坏死和出血为主要特征的传染病；具有高度传染性，且发病率和死亡率都很高，常造成严重的经济损失。该病主要发生于1～3周龄的雏番鸭，尤其是10日龄左右的雏番鸭，而当达到3周龄以上就基本不发病了。本病最早于20世纪80年代中后期出现于中国福建和法国西部Brittany地区，20世纪90年代初才认识到它是不同于小鹅瘟的独立疾病。如果对死亡的番鸭处理不当，往往造成病毒的蔓延，产生更大的危害。因此，就需要筛选出效价高、免疫原性好的番鸭细小病毒来制备疫苗。而且，由于病毒变异导致使用的疫苗效价降低，也需要筛选出变异的病毒株来制备疗效更高的疫苗。

发明内容

本发明的目的是提供一种筛选出的番鸭细小病毒，及其在制备疫苗中的应用；用该病毒制备的疫苗具有高效、安全性好、保护率高的优点，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种番鸭细小病毒，为YBMDV株，已于2013年11月08日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.8504。

本发明的番鸭细小病毒用于制备灭活疫苗；

本发明的番鸭细小病毒还用于制备免疫抗体。

本发明筛选的番鸭细小病毒具有毒性小，且免疫原性高的特点，用番鸭细小病毒YBMDP株接种番鸭胚，分别收获死亡胚胚体和胚液，经研磨、冻融后收取病毒液，经超滤浓缩、甲醛溶液灭活后，加油佐剂混合乳化制成疫苗。能提高种番鸭的抗体，保证其子代母源抗体水平，预防番鸭细小病毒引起的雏鸭细小病毒感染，此疫苗具有高效、安全性好的优点。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行详细的描述。

一、YBMDV株的筛选

2011年浙江省某鸭场爆发了急性的番鸭细小病毒病，取病死鸭的胰脏及肠道，将胰脏及肠道组织用无生理盐水匀浆制成20%悬液，3000r/min离心15min，取上清除菌后经尿囊腔分别接种13日龄番鸭胚，孵化120小时，收集尿囊液及胚体组织，经匀浆后，反复冻融3次，取上清液冻存。收获的病毒液经纯化后进行了病毒含量、免疫原性、特异性及纯净性等方面的病毒特性的分析检测，结果表明该毒株病毒含量为10^5.7ELD₅₀/0.2ml,最小免疫剂量为10^2.0ELD₅₀/0.2ml，该病毒仅与番鸭细小病毒发生特异性反应，无细菌、支原体及外源病毒污染，适合作为制苗用毒株。将筛选YBMDV株于2013年11月08日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.8504。

对于本发明筛选的毒株的性状进行检测，结果表明，该株病毒属细小病毒，圆形无囊膜，直径在20μｍ左右、对乙醚、胰蛋白酶、酸不敏感，对红细胞无凝集现象。该病毒可引起雏番鸭发生以出血性肠炎为特征的急性败血性传染病。该毒株制备的疫苗免疫成年番鸭后，能保护免疫4个月内番鸭所产子代免受流行毒株的攻击。该毒株作100倍稀释后，与等量雏番鸭细小病毒病抗血清中和，接种13日龄番鸭胚，结果表明，中和组番鸭胚全部健活，而病毒对照组番鸭胚全部死亡。

对筛选的YBMDV株的结构基因VP进行测序,结果VP全长为2199bp，编码732个氨基酸；NCBI的blast序列分析表明，YBMDV株的结构基因VP与已公开的番鸭细小病毒的VP存在差异位点，同源性为97.7％～98.3％（即存在着9-16个氨基酸的差异）。

为了检测上述氨基酸的差异对YBMDV株抗原性的影响，用YBMDV株来制备抗原来检测其免疫原性。

二、制苗用抗原的制备