[发明专利]慢性神经退行性疾病早期诊断标志物及应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学及蛋白质工程领域，具体地说，涉及一种慢性神经退行性疾病早期诊断标志物及应用。

背景技术

朊蛋白病是发生在哺乳动物中枢神经系统的一类神经退行性疾病，具有较长的潜伏期，由于早期治疗对于该病的治愈有着重要意义，因此对于朊蛋白病的早期诊断的研究势在必行。目前对于神经退行性疾病早期诊断的研究主要围绕蛋白组学、基因组学、代谢组学以及影响观察几个方面进行展开。其中以二维聚丙烯酰胺凝胶电泳为基础的蛋白组学一直是近年来的研究热点。蛋白质样品中的不同类型的蛋白质可以通过二维电泳进行分离。二维电泳可以将不同种类的蛋白质按照等电点和分子量差异进行高分辨率的分离。成功的二维电泳可以将2000～3000种蛋白质进行分离。电泳后对胶进行高灵敏度染色，例如银染或荧光染色。如果是比较两种样品之间蛋白质表达的异同，可以在同样条件下分别制备二者的蛋白质样品，然后在同样条件下进行二维电泳，染色后比较两块胶；或者，可以将二者的蛋白质样品分别用不同的荧光染料标记，然后两种蛋白质样品在一块胶上进行二维电泳的分离，最后通过荧光扫描技术分析结果。

胶染色后可以利用凝胶图像分析系统成像，然后通过分析软件对蛋白质点进行定量分析，并且对感兴趣的蛋白质点进行定位。通过专门的蛋白质点切割系统，可以将蛋白质点所在的胶区域进行精确切割。接着对胶中蛋白质进行酶切消化，酶切后的消化产物经脱盐/浓缩处理后就可以通过点样系统将蛋白质点样到特定材料的表面（MALDI-TOF）。最后这些蛋白质就可以在质谱系统中进行分析，从而得到蛋白质的定性数据，这些数据可以用于构建数据库或与已有的数据库进行比较分析。

LCM-二维电泳-质谱技术是蛋白质组学研究的经典技术路线，除此以外，LCM-抗体芯片也是一条重要的蛋白质组学研究的技术路线。即，通过LCM技术获得感兴趣的细胞类型，制备细胞蛋白质样品，蛋白质经荧光染料标记后与抗体芯片杂交，从而可以比较两种样品蛋白质表达的异同。

发明内容

本发明的目的是提供一种慢性神经退行性疾病早期诊断标志物。

本发明的另一目的是提供所述标志物在慢性神经退行性疾病早期诊断中的应用。

为了实现本发明目的，本发明的一种慢性神经退行性疾病早期诊断标志物，所述标志物为β型可溶性NSF附着蛋白(Soluble NSF attachment proteins,SNAPs)β-SNAPs，其氨基酸序列如Seq ID No.1所示，或该序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

本发明还提供所述标志物β-SNAPs在制备慢性神经退行性疾病早期诊断试剂中的应用。其是以β-SNAPs作为免疫原，通过免疫动物，获得相应抗体，将制备的抗体作为诊断试剂或诊断试剂中的有效成分。

本发明还提供一种慢性神经退行性疾病早期诊断试剂，其是以β-SNAPs作为免疫原，通过免疫动物，获得的相应抗体即为诊断试剂。

本发明还提供一种慢性神经退行性疾病早期诊断试剂盒，所述试剂盒中含有上述诊断试剂。

本发明中涉及的慢性神经退行性疾病包括但不限于传染性海绵状脑病（TSE）和阿茨海默症（AD）等。

目前对于慢性神经退行性疾病（尤其是海绵状脑病和阿茨海默症），在无症状期和早期发病阶段，还没有找到行之有效的检测手段。目前的检测手段仍停留在发病后组织样本的提取分析和死亡后的组织病理学检测。由于目前没有治愈这类疾病的方法，因此慢性神经退行性疾病的早期诊断对于人和动物的健康具有十分重大的意义。本发明首次发现一种仅存在于脑组织中的蛋白N可溶性乙马来酰亚氨融合蛋白附着蛋白β型（β-SNAPs），其表达和含量变化可以指示慢性神经退行性疾病的早期发生，并开发出检测这种蛋白变化的蛋白质组学方法，为慢性神经退行性疾病的早期诊断和早期发现开辟了新思路，通过更深入的机理研究和损耗-时间曲线的建立，有助于将慢性神经退行性疾病的损失降到最低。