[发明专利]一种抗氧化多肽

权利要求书

1.一种抗氧化多肽，其特征在于：所述抗氧化多肽的氨基酸序列为：aetiglap。

2.一种如权利要求1所述的抗氧化多肽的制备方法，其特征在于：以小球藻为原料提取蛋白，然后采用酸性蛋白酶对其进行酶解，分离纯化、冷冻干燥得到抗氧化多肽。

3.根据权利要求2所述的一种抗氧化多肽的制备方法，其特征在于：所述酶解条件为：pH为3.0、温度50℃、酶解时间为5h、酶-底物配比为3000U/g；所述酶为酸性蛋白酶。

4.根据权利要求2所述的一种抗氧化多肽的制备方法，其特征在于：所述分离纯化的手段包括超滤、SP-Sephadex C-25离子交换色谱、Sephadex G-50分子筛和RP-HPLC反相高效液相色谱。

5.根据权利要求2所述的一种抗氧化多肽的制备方法，其特征在于：所述分离纯化的具体步骤为：

（1）酶解产物首先利用分子量截留范围为8000Da和3500Da的超滤膜对酶解产物进行超滤分离，将其分为3个分子量范围不同的组分，分别为分子量大于8000Da的组分、分子量介于3500Da和8000Da的组分、分子量小于3500Da的组分；

（2）收集具有最佳抗氧化活性的组分，再用SP-Sephadex C-25阳离子交换色谱进行分离，上样后洗去未吸附组分，再以含0～0.35mol/L NaCl的0.02mol/L、pH4.0乙酸-乙酸钠缓冲液进行线性梯度洗脱，流速为0.5ml/min，在225nm下进行测量，测定各吸收峰对应的洗脱组分的抗氧化活性；

（3）收集具有最佳抗氧化活性的峰，再用Sephadex G-50凝胶色谱进行分离，洗脱液为去离子水，流速为0.5ml/min，在225nm下进行测量，测定各吸收峰对应的洗脱组分的抗氧化活性；

（4）收集具有最佳抗氧化活性的峰，再利RP-HPLC反相高效液相色谱进行进一步的分离，所用色谱柱为Gemini 5μ C18，上样量为100μL，流速为1ml/min，检测波长为215nm；洗脱液自含体积比为10%乙腈和90%水的混合液开始，至体积比为90%乙腈和10%水的混合液结束，进行梯度洗脱，收集体积比为43%乙腈和57%水处的洗脱峰，得到本发明的高纯度的抗氧化多肽；利用蛋白质固相序列分析仪鉴定多肽的氨基酸序列。