[发明专利]一种利用海带高效降解菌株生产海带酒精饮料的方法

权利要求书

1.一株具有高效降解海带能力的菌株(Microbulbifer elongates)及其突变菌株，已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为：CGMCC No.6242。

2.根据权利要求1所述的海带高效降解菌，其特征在于：

(1)细胞形态：革兰氏阴性菌，细胞形态生长前期为杆状，生长后期为球状，在显微镜下呈现运动性；

(2)生理生化特征：好氧生长；在25-50℃、pH6.0-9.5、盐度0-6.0％(w／v)范围内均能生长，最佳生长条件在37℃、pH7.5、盐度1.0％左右；可以在4天时间内完全降解海带块；

(3)酶学特征：氧化酶阳性；触媒阳性；高效表达包括海藻酸钠裂解酶、海带淀粉酶及纤维素酶在内的海带降解所需酶。

3.根据权利要求1所述的海带高效降解菌，其特征在于：所述菌株的16s核糖体亚基基因(16s rRNA)序列包含如Seq ID No.1所示的核苷酸序列。

4.根据权利要求1所述的突变菌株，其特征在于：所述突变菌株为对菌株CGMCC No.6242原代进行诱变、驯化、基因重组等操作或者经自然突变而获得的突变菌株。

5.一种利用权利要求1所述的海带高效降解菌生产海带酒精饮料的方法，包括以下步骤：

(1)将菌株CGMCC No.6242接种至种子液培养基，培养之后的菌液作为种子液；

(2)将种子液转接至酶发酵培养基中进行发酵培养，得到具有海带降解酶活性的酶发酵液；

(3)将酶发酵液完全除菌处理后转接至含海带粉的酶解培养基中进行酶解处理，得到具有大量海带寡糖的发酵液；

(4)将酿酒酵母接种至种子培养基，培养之后的菌液作为种子液；

(5)将酿酒酵母种子液转接至补加葡萄糖后的具有大量海带寡糖的发酵液进行发酵培养，依次经过好氧发酵、厌氧发酵、离心除去海带藻体及酵母菌体后取上清，得到具有大量海带寡糖的酒精饮料。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述方法步骤(1)中的种子液培养基以及所述方法步骤(2)中的酶发酵培养基的配方为1／3浓度的天然海水中加入0-0.5％的酵母提取物以及1％的海带。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述方法步骤(3)中的酶发酵液的除菌处理过程包括如下步骤：

(1)酶发酵液经12000转／分，20分钟离心后取上清液；

(2)上清液通过滤纸过滤后取滤出液；

(3)上一步得到的滤出液通过0.45微米孔径的醋酸纤维素滤膜过滤后取滤出液；

(4)上一步得到的滤出液通过0.22微米孔径的醋酸纤维素滤膜过滤后得到完全除菌处理的酶发酵液。

8.根据权利要求5-7任一项所述的方法，其特征在于：

(1)所述方法步骤(1)中菌株CGMCC No.6242的接种量为10％，培养条件为振荡140转／分、28℃，培养时间为24小时。

(2)所述方法步骤(2)中种子液的接种量为1％，培养条件为搅拌300转／分、28℃、通气3.0升／分，培养时间为104小时。

(3)所述方法步骤(3)中的处理条件为搅拌50转／分、28℃、不通气，处理时间为24小时。

(4)所述方法步骤(4)中酿酒酵母的接种量为10％，振荡140转／分、35℃，培养时间为48小时。

(5)所述方法步骤(5)中酿酒酵母种子液的接种量为10％，好氧培养条件为搅拌300转／分、30℃、通气3.0升／分，培养时间为48小时，厌氧培养条件为28℃、不搅拌、不通气，培养时间为48小时。

9.根据权利要求5-7任一项所述的方法，其特征在于：

(1)所述方法步骤(2)获得酶发酵液中的海藻酸钠裂解酶酶活、海带淀粉酶酶活以及纤维素酶活分别为300-1200U／m1、30-300U／m1及30-300U／ml；

(2)所述方法步骤(3)获得具有大量海带寡糖的发酵液中总糖含量以及还原糖含量分别为10-30g／1、1-10g／1；

(3)所述方法步骤(5)获得具有大量海带寡糖的酒精饮料中酒精含量为0.1-10％。

10.根据权利要求5-7任一项所述的方法，其特征在于：根据需要，可任意选取方法对具有海带降解酶活力的酶发酵液以及具有大量海带寡糖的发酵液进行后续处理，从中分离纯化得到酶制品以及海带寡糖制品。