[发明专利]CNTF在角膜缘干细胞增殖和角膜上皮损伤修复中的应用

说明书

技术领域

本发明属于眼科疾病治疗技术领域，具体涉及一种睫状神经营养因子（CNTF）在促进角膜缘干细胞增殖和促进角膜上皮损伤修复中的应用。

背景技术

角膜的透明及功能的完整取决于角膜各层组织的结构和代谢的正常，而位于最外层的角膜上皮组织无疑对此起着相当重要的作用。角膜上皮是防御外界致病因子侵犯的物理屏障，其完整性的维持依赖于上皮细胞的细胞间，细胞与基底膜之间的紧密连接和锚定连接以及上皮细胞不断自我更新。

角膜上皮层受损可影响细胞间的连接，引起细胞膜的通透性和选择性发生变化，从而影响其屏障功能，导致角膜易受外界致病因子的侵害引起炎症导致角膜混浊，甚至引起失明。角膜损伤后的再上皮化是损伤修复的一个最基本的过程，上皮化可以迅速重建上皮屏障，这对于保持角膜的结构完整及正常功能非常重要。角膜上皮细胞的自我更新源于角膜缘干细胞的不断增生分化，表现为增生的基底细胞的不断向心、向上移动至翼状细胞层进行分化且形成细胞与细胞间及细胞与基质间的紧密连接，从而取代不断脱落的表皮细胞层。简而言之，上皮细胞的不断更新依赖于基底细胞的不断增生、分化、移行与表层细胞的不断脱落之间的动态平衡。各种物理损伤、化学损伤、机械损伤、病原微生物、内分泌及免疫性因素均可导致角膜上皮损伤。如糖尿病性角膜病变，有研究表明：47%-64%的糖尿病患者可能会出现原发性角膜病变，其临床特征主要表现为角膜敏感度下降、上皮愈合延迟、神经营养性角膜溃疡等症状。糖尿病患者在进行白内障或视网膜手术后可能出现角膜上皮再生延迟，甚至出现反复剥脱现象。

角膜上皮损伤后的愈合是一个非常复杂的过程，有许多细胞参与，各种细胞又分泌多种细胞因子，这些细胞之间、因子之间、细胞和因子之间存在着错综复杂的关系，涉及到细胞运动、粘附、增殖和分化等各个方面，构成一个复杂的网络调控体系。角膜上皮损伤后的愈合过程非常复杂，有许多因素参与调节：①源于基底细胞及角膜缘干细胞的不断增殖、分化的上皮细胞的自我更新对上皮细胞损伤后的迅速再上皮化、重建上皮屏障，从而保持角膜的结构完整及正常功能非常重要；②在角膜上皮愈合过程中，由细胞表达的不同的细胞外基质分子及细胞表面受体，对由细胞骨架介导的细胞粘附和运动方面起关键性作用；③许多生长因子如EGF、KGF、HGF、TGF、PDGF等）通过自分泌或/和旁分泌途径参与调节角膜上皮细胞的增殖及迁移，维持角膜结构和功能的正常；④位于细胞表面的细胞粘附分子（如整合素）以受体-配体的形式发挥作用，在角膜创伤愈合中起重要作用；⑤另外，其他一些因素如神经性因素等也参与调节角膜上皮细胞的屏障功能及创伤愈合。

不论何种原因引起的角膜上皮缺损，能否迅速完整地修复，是恢复角膜上皮细胞的屏障功能、促进创伤愈合、保持良好视力的关键。因此全面了解角膜上皮细胞屏障功能及创伤愈合的调节因素，对临床上治疗角膜上皮细胞屏障功能障碍及促进创伤愈合来讲是非常重要的。

发明内容

本发明的目的是提供一种睫状神经营养因子在促进角膜缘干细胞增殖和促进角膜上皮损伤修复中的应用，具体涉及睫状神经营养因子及其衍生物在制备药物及药物组合物中的用途，可用于眼表角膜和结膜上皮干细胞的培养、糖尿病角膜病变的治疗、神经性角膜炎的治疗、角膜缘干细胞缺乏症的治疗。

本发明首先提供一种睫状神经营养因子的新用途，即在制备治疗角膜缘干细胞增殖和促进角膜上皮损伤修复制品中的应用；

所述的制品为滴眼液，其中包含有药理有效浓度的睫状神经营养因子；

所述的制品还可以是注射液；

所述的睫状神经营养因子，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1;

为了提高睫状神经营养因子在治疗角膜缘干细胞增殖和促进角膜上皮损伤修复中的效果，发明人对睫状神经营养因子的氨基酸序列进行了改造，改造后的氨基酸序列为SEQ ID NO:2。

本发明发现CNTF不仅能促进角膜缘干细胞增殖和克隆形成能力，还能促进正常小鼠和糖尿病小鼠的角膜上皮的损伤修复，可用于眼表角膜和结膜上皮干细胞的培养、糖尿病角膜病变的治疗、神经性角膜炎的治疗、角膜缘干细胞缺乏症的治疗。

附图说明

图1：在TKE2的培养基中添加不同浓度的CNTF对细胞克隆形成能力的影响，培养液中添加10ng/ml和20ng/ml CNTF能有效促进TKE2细胞克隆的形成能力。