[发明专利]一种保持角膜上皮状细胞层透明度的细胞株

说明书

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种保持角膜上皮状细胞层透明度的细胞株。

背景技术

角膜处于眼睛的最外侧，也就是眼珠前端位置的透明膜。因为是直接和外界接触的组织，所以也是最容易受到热、化学腐蚀等的伤害，用来生产角膜上皮的干细胞会因为某种损伤而消失。类似这类的角膜上皮干细胞病症，现在的技术是很难治愈的，如果要彻底治疗，就必须要给已失去了干细胞的角膜上皮提供干细胞。另一方面，关于角膜移植手术，由于角膜提供的人数较少，和等待移植的患者人数相比较，提供的人数是远远不足的。另外在角膜移植的时候，为了防止出现排异而使用免疫抑制剂造成术后的一些合并症也是比较容易发生的问题。

为了弥补角膜捐献者过少这个问题，除了异体角膜，还可以使用自体角膜进行自体移植，自体角膜培养移植。另外，双眼都有疾患的情况，可以使用表皮或口腔粘膜代替角膜上皮进行自体表皮培养移植或者自体口腔粘膜培养移植。另外，当使用培养角膜，培养表皮，培养口腔粘膜等对角膜上皮状细胞层进行角膜上皮治疗时，角膜上皮状细胞层的透明度是非常重要的。但是，以上所描述的使用上皮系细胞培养来制作角膜上皮状细胞层时，大多数都使用Swiss3T3作为滋养层细胞，但Swiss3T3是会形成色素沉淀的，因此发明者们成功的发明了可以维持透明度的新细胞株。

为了防止上皮系细胞的色素沉淀，抑制有色素生产性能的细胞增殖，抑制生产色素的活性，抑制从上皮系细胞取得色素，这些是至关重要的。

针对上述问题，本发明提供了一种新的抑制上皮系细胞色素形成的细胞株。出人意料的是，在该细胞株的存在下，提供了透明度高的角膜上皮状细胞层。因而使得针对角膜上皮干细胞衰竭症等的角膜上皮疾患提供大面积均匀且 透明的角膜替代品成为可能。

发明内容

本发明的发明者经过大量研究发现，特定的细胞对上皮样细胞层的色素沉淀有着显著的抑制效果。

在本发明的一方面，提供了一种保持角膜上皮状细胞层透明度的细胞株，细胞株名称为小鼠胚胎细胞RMD6，保藏在中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：C201409。保藏日期为2014年1月7日。

在本发明的另一方面，提供了一种细胞培养物，其包含本发明的小鼠胚胎细胞RMD6以及上皮系细胞。

在本发明的一个实施方式中，所述上皮系细胞的生物来源选自：小鼠、大鼠、猪、牛、猴子和人。

在本发明的一个实施方式中，所述RMD6细胞株作为滋养层细胞，抑制上皮系细胞的色素产生。

在本发明的另一方面，提供了一种培养悬液，其包含本发明的小鼠胚胎细胞RMD6。

在本发明的另一方面，提供了一种培养悬液，其包含本发明的小鼠胚胎细胞RMD6的细胞提取物。

在本发明的另一方面，提供了一种小鼠胚胎细胞RMD6的制备方法，所述方法包括以下步骤：

a.取小鼠皮肤片，进行细胞株的克隆过程；

b.将上述克隆的细胞株与上皮系细胞共培养的培养过程；

c.评价上皮系细胞的色素生产能力，选定能够保持角膜上皮状细胞层透明度的细胞株。

在本发明的另一方面，提供了本发明所述细胞培养物在进行药剂筛选中的应用，其中所述细胞培养物包含本发明的小鼠胚胎细胞RMD6以及上皮系细胞。

在本发明的另一方面，提供了本发明所述细胞培养物在制备用于治疗角膜上皮干细胞衰竭症的药物中的应用，其中所述细胞培养物包含本发明的小鼠胚胎细胞RMD6以及上皮系细胞。

发明详述

本发明的细胞株能够有效抑制上皮状细胞层的色素沉淀的作用，提供了合适的角膜上皮状细胞层。因此，可以提供用于角膜上皮疾患的治疗所需的培养组合物并用于药物的筛选。

本发明的株化细胞能够抑制上皮状细胞层的色素沉淀。这里所指的上皮状细胞层是由角膜上皮细胞，表皮角质细胞，口腔粘膜细胞等的上皮系细胞组成的。所谓的角膜上皮细胞是指构成角膜上皮的上皮系细胞。表皮角质细胞指的是构成表皮的上皮系细胞。另外，口腔粘膜上皮细胞指的是构成口腔的上皮系细胞。当上皮状细胞层中混入了有产生色素性能的细胞时，本发明的株化细胞能很好的抑制生产色素细胞的色素生产能力。另外还能抑制由生产色素细胞产出的色素进入上皮系细胞。本发明的“抑制色素沉淀的能力”可能是上述的某一种，也可能是2种作用同时存在。本发明的上皮系细胞不论是从那个部位由来，从角膜上皮基底层、表皮基底层、口腔粘膜基底层都是可以采取的。